[發(fā)明專利]一種綠僵菌產(chǎn)孢的固體發(fā)酵培養(yǎng)方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210068220.2
• 申請日: 2022-01-20
• 公開（公告）號: CN114438010A
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 程東美;何俊烺;梁超鵬;張志祥
• 申請（專利權(quán)）人: 仲愷農(nóng)業(yè)工程學院
• 主分類號: C12N3/00
• 分類號: C12N3/00;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 廣州市時代知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44438
• 代理人: 梁美玲

1.一種綠僵菌產(chǎn)孢的固體發(fā)酵培養(yǎng)方法，其特征是：包括以下步驟，

S1、將綠僵菌菌種接種到第一固體培養(yǎng)基中進行活化，得到活化的綠僵菌，其中，所述第一固體培養(yǎng)基包括麥芽糖、酵母提取粉、蛋白胨、黃粉蟲蛻、瓊脂和水；

S2、挑取活化后的綠僵菌孢子或菌苔接種到液體培養(yǎng)基進行液體發(fā)酵培養(yǎng)，得到綠僵菌液體發(fā)酵產(chǎn)物，其中，所述液體發(fā)酵培養(yǎng)包括麥芽糖、酵母提取粉、蛋白胨和水組成；

S3、將綠僵菌液體發(fā)酵產(chǎn)物置于由豆渣和谷殼組成的第二固體培養(yǎng)基中以袋料法進行固體發(fā)酵，培養(yǎng)的溫度為24℃～26℃，培養(yǎng)的濕度為80％～90％，每培養(yǎng)3d后通入空氣，共培養(yǎng)為3d～10d直至內(nèi)外長出綠色孢子，得到綠僵菌粗品。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的綠僵菌產(chǎn)孢的固體發(fā)酵培養(yǎng)方法，其特征是：所述第一固體培養(yǎng)基的組分重量配比是：麥芽糖10g～40g、酵母提取粉5g～10g、蛋白胨0g～5g、黃粉蟲蛻0g～5g、瓊脂15g～20g、水1L。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的綠僵菌產(chǎn)孢的固體發(fā)酵培養(yǎng)方法，其特征是：所述液體培養(yǎng)基的組分重量配比是：麥芽糖10g～40g、酵母提取粉5g～10g、蛋白胨5g～10g、水1L。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的綠僵菌產(chǎn)孢的固體發(fā)酵培養(yǎng)方法，其特征是：所述第二固體培養(yǎng)基的組分重量份是：豆渣50份～90份，谷殼10份～50份。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的綠僵菌產(chǎn)孢的固體發(fā)酵培養(yǎng)方法，其特征是：所述第二固體培養(yǎng)基的厚度是1cm～5cm。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的綠僵菌產(chǎn)孢的固體發(fā)酵培養(yǎng)方法，其特征是：所述第二固體培養(yǎng)基還添加有補充料，每100g補充料中包含乳糖1g～10g、酵母提取粉0.5g～4g、花生油1mL～2mL和1mL～20mL水。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的綠僵菌產(chǎn)孢的固體發(fā)酵培養(yǎng)方法，其特征是：所述S3中，綠僵菌液體發(fā)酵產(chǎn)物接種到液體培養(yǎng)基中的接種量為10％～20％。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的綠僵菌產(chǎn)孢的固體發(fā)酵培養(yǎng)方法，其特征是：所述S1中，通過以下方式獲得活化綠僵菌菌種：所述綠僵菌菌種在25℃下傳代培養(yǎng)、活化，直至長滿綠色孢子，所述綠色孢子為活化后的綠僵菌孢子。

9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的綠僵菌產(chǎn)孢的固體發(fā)酵培養(yǎng)方法，其特征是：所述S2中，液體發(fā)酵培養(yǎng)于三角瓶中進行，培養(yǎng)條件為溫度23℃～26℃，培養(yǎng)時間為72h～120h，搖床轉(zhuǎn)速為120～150r/min。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的綠僵菌產(chǎn)孢的固體發(fā)酵培養(yǎng)方法，其特征是：所述第二固體培養(yǎng)基于蒸汽滅菌溫度121℃和蒸汽滅菌的時間25min～40min下獲得。