[發明專利]DcBGLU2L石斛多糖含量分子標記及其開發方法與應用在審

申請號：	202210065299.3	申請日：	2022-01-18
公開（公告）號：	CN114480707A	公開（公告）日：	2022-05-13
發明（設計）人：	王志才;王美娜;趙美麗;張曉捷;李健;崔洪秋	申請（專利權）人：	深圳市蘭科植物保護研究中心
主分類號：	C12Q1/6895	分類號：	C12Q1/6895;C12Q1/6809;C12N15/11
代理公司：	南京求真專利代理事務所(普通合伙) 32600	代理人：	劉騏鳴
地址：	518000 廣東省***	國省代碼：	廣東;44
權利要求書：	查看更多	說明書：	查看更多
摘要：
搜索關鍵詞：	dcbglu2l 石斛多糖含量分子標記及其開發方法應用
鉆瓜網技術展會專利詞庫專利權人專利榜在售專利公布日期熱門專利

【說明書】：

本發明公開了一種DcBGLU2L石斛多糖含量分子標記及其開發方法與應用。采用蘭花組織培養中常用的兩種植物激素NAA和6?BA處理鐵皮石斛幼苗，對鐵皮石斛幼苗中的主要藥用化合物進行了比較分析，并對相應樣品進行轉錄組測序分析差異表達基因，明確了不同處理條件下化合物積累和差異基因表達模式的對應關系。其中，DcBGLU2L基因表達與多糖含量密切相關，其表達水平可以指示多糖積累水平，因此可以作為指示多糖含量的分子標記；可以應用在生產實踐中，對不同激素處理、不同濃度、不同處理時間、不同生長時期受體材料中的多糖含量進行監測；也為人工控制石斛活性成分的生產鋪平了道路。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別是一種DcBGLU2L石斛多糖含量分子標記及其開發方法與應用。

背景技術

石斛屬是蘭科植物中最大的屬之一，在世界范圍內包含1500多種，具有很高的經濟和科學研究價值。鐵皮石斛(D.officinale)是一種廣泛分布于亞洲亞熱帶的瀕危多年生附生草本植物，被列為最珍貴的石斛屬植物之一，具有健胃、促進體液分泌、調節免疫、抑癌等多種功效。其莖中含有多種活性成分，主要包括多糖、生物堿、黃酮類、酚類等。

鐵皮石斛根據消費者的喜好可以果汁、粉末、膠囊和功能性酒或茶的形式廣泛用于藥物和膳食補充劑，導致對該物種的需求不斷增加以及農業生產集約化。據報道，2018年中國南方有6000多公頃的農地用于生產近2萬多噸鐵皮石斛鮮條。因此，鐵皮石斛生產的質量至關重要，它會受到多種遺傳和環境因素的影響，導致其活性成分含量不穩定。

目前在鐵皮石斛快繁體系中廣泛使用的培養基誘導種子萌發導致了后代表型性狀和藥用品質不穩定。因此，如何準確在鐵皮石斛組織培養擴繁的生產過程中對多糖等活性成分的實時監測，并根據監測結果進行培養基微調是確保產品品質穩定的關鍵環節。

發明內容

本發明提供了一種DcBGLU2L石斛多糖含量分子標記及其開發方法與應用，以實現實時、可跟蹤的監測不同激素處理、不同處理時間、不同濃度、不同生長時期受體材料中多糖含量。

實現本發明目的的技術解決方案為：

一種DcBGLU2L石斛多糖含量分子標記，分子標記DcBGLU2L在NCBI gene bank中的基因檢索編號為Loc110095182，通過引物對以石斛RNA反轉錄的cDNA為模板，采用qRT-PCR擴增來指示其表達水平。

優選的，所述引物對為SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；

所述的SEQ ID NO.1序列為：5'-CTTTCAGCAAATCAGAATCCCA-3'；

所述的SEQ ID NO.2序列為：5'-ATGCCTGACTGGTTGGTGGA-3'。

一種DcBGLU2L石斛多糖含量分子標記的開發方法，對組織培養中激素處理后的石斛樣品進行qRT-PCR基因表達檢測，與對照樣品進行比較，其表達量與多糖含量呈正相關關系，據此判斷多糖含量的變化情況。

優選的，所述qRT-PCR基因表達檢測具體為，取用少量樣品進行微量RNA提取及逆轉錄成cDNA，采用qRT-PCR方法對DcBGLU2L基因表達水平進行檢測和比較。

優選的，所述少量樣品為50-100mg的植物組織鮮樣。

優選的，所述少量樣品為葉片、1cm長的莖、根部組織、圓球體或愈傷組織。