[發(fā)明專利]DcBGLU2L石斛多糖含量分子標(biāo)記及其開(kāi)發(fā)方法與應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210065299.3
• 申請(qǐng)日: 2022-01-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114480707A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-05-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王志才;王美娜;趙美麗;張曉捷;李健;崔洪秋
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳市蘭科植物保護(hù)研究中心
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/6809;C12N15/11
• 代理公司: 南京求真專利代理事務(wù)所(普通合伙) 32600
• 代理人: 劉騏鳴

1.一種DcBGLU2L石斛多糖含量分子標(biāo)記，其特征在于，分子標(biāo)記DcBGLU2L在NCBI genebank中的基因檢索編號(hào)為L(zhǎng)oc110095182，通過(guò)引物對(duì)以石斛RNA反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板，采用qRT-PCR擴(kuò)增來(lái)指示其表達(dá)水平。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的DcBGLU2L石斛多糖含量分子標(biāo)記，其特征在于，所述引物對(duì)為SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；

所述的SEQ ID NO.1序列為：5'-CTTTCAGCAAATCAGAATCCCA-3'；

所述的SEQ ID NO.2序列為：5'-ATGCCTGACTGGTTGGTGGA-3'。

3.權(quán)利要求1所述的DcBGLU2L石斛多糖含量分子標(biāo)記的開(kāi)發(fā)方法，其特征在于，對(duì)組織培養(yǎng)中激素處理后的石斛樣品進(jìn)行qRT-PCR基因表達(dá)檢測(cè)，與對(duì)照樣品進(jìn)行比較，其表達(dá)量與多糖含量呈正相關(guān)關(guān)系，據(jù)此判斷多糖含量的變化情況。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的DcBGLU2L石斛多糖含量分子標(biāo)記的開(kāi)發(fā)方法，其特征在于，所述qRT-PCR基因表達(dá)檢測(cè)具體為，取用少量樣品進(jìn)行微量RNA提取及逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，采用qRT-PCR方法對(duì)DcBGLU2L基因表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)和比較。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的DcBGLU2L石斛多糖含量分子標(biāo)記的開(kāi)發(fā)方法，其特征在于，所述少量樣品為50-100mg的植物組織鮮樣。

6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的DcBGLU2L石斛多糖含量分子標(biāo)記的開(kāi)發(fā)方法，其特征在于，所述少量樣品為葉片、1cm長(zhǎng)的莖、根部組織、圓球體或愈傷組織。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的DcBGLU2L石斛多糖含量分子標(biāo)記的開(kāi)發(fā)方法，其特征在于，利用RNAi敲低DcBGLU2L的表達(dá)，樣品中多糖含量相應(yīng)降低。

8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的DcBGLU2L石斛多糖含量分子標(biāo)記的開(kāi)發(fā)方法，其特征在于步驟如下：

步驟1.石斛材料處理；

步驟2.多糖含量測(cè)定；

步驟3.cDNA文庫(kù)制備和轉(zhuǎn)錄組測(cè)序；

步驟4.轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)處理與分析；

步驟5.實(shí)時(shí)定量qRT-PCR驗(yàn)證；

步驟6.RNAi敲低DcBGLU2L的表達(dá)及對(duì)應(yīng)材料中多糖含量測(cè)定。

9.權(quán)利要求1所述的DcBGLU2L石斛多糖含量分子標(biāo)記的應(yīng)用，其特征在于，作為監(jiān)測(cè)多糖含量的分子標(biāo)記，在監(jiān)測(cè)石斛體內(nèi)多糖含量、指示石斛體內(nèi)多糖的積累水平、檢測(cè)石斛質(zhì)量、鑒定石斛品質(zhì)、研究植物激素對(duì)石斛活性成分積累的影響及研究植物激素處理下改變化合物積累的潛在機(jī)制中的應(yīng)用。