[發明專利]基于丁基羅丹明B熒光猝滅法測定血清過氧化氫酶活度的方法

在審

• 申請號: 202210065184.4
• 申請日: 2022-01-20
• 公開（公告）號: CN114397284A
• 公開（公告）日: 2022-04-26
• 發明（設計）人: 董娜;張愛菊;白瑩;張小林
• 申請（專利權）人: 甘肅醫學院
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 西安合創非凡知識產權代理事務所(普通合伙) 61248
• 代理人: 支思迪

1.基于丁基羅丹明B熒光猝滅法測定血清過氧化氫酶活度的方法，其特征在于：基于Fenton試劑作用下的丁基羅丹明B熒光猝滅體系完成過氧化氫酶活度測定，在Fe²⁺的作用下，b-RhB遇H₂O₂出現熒光猝滅，基于加酶前后的熒光變化值確定CAT活度。

2.如權利要求1所述的基于丁基羅丹明B熒光猝滅法測定血清過氧化氫酶活度的方法，其特征在于：測定時，取人體血清50 μL置于50 mL容量瓶中，加2.50 mL 濃度為1 U/mL 的H₂O₂底液，30 ℃恒溫反應16 min，再依次加入3.50 mL b-RhB、2.50 mL HAc-NaAc緩沖液、0.40 mL Fe²⁺溶液，室溫反應20 min后定容，靜置1 min，在1 cm吸收池中測定590 nm發射波長處熒光強度F，同步測定酶空白體系F₀，CAT活度E由△F確定，其中，△F = F -F₀。

3.如權利要求2所述的基于丁基羅丹明B熒光猝滅法測定血清過氧化氫酶活度的方法，其特征在于：酶空白體系F₀通過以下步驟測定：

取人體血清50 μL置于50 mL容量瓶中，加0.40 mL Fe²⁺溶液和2.50 mL HAc-NaAc緩沖液，振蕩0.5min，使酶失活，再加入2.50 mL 濃度為1 U/mL 的H₂O₂底液，3.50 mL b-RhB，室溫反應20 min后定容，靜置1 min。

4.如權利要求2所述的基于丁基羅丹明B熒光猝滅法測定血清過氧化氫酶活度的方法，其特征在于：熒光變化△F與CAT活度E(U/mL)在0.0005～0.05 U/mL活度范圍內有良好的線性關系：△F=-1.476+1205E，r=0.9974，檢測限最低為2.49×10^-5 U/mL。