[發明專利]一種胰腺癌早期診斷標志物及其組織篩選方法和應用

在審

• 申請號: 202210064784.9
• 申請日: 2022-01-20
• 公開（公告）號: CN114720615A
• 公開（公告）日: 2022-07-08
• 發明（設計）人: 王紅霞;俞思薇
• 申請（專利權）人: 上海市第一人民醫院
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 上海元好知識產權代理有限公司 31323
• 代理人: 賈慧琴;包姝晴

1.一種胰腺癌早期診斷標志物的組織篩選方法，其特征在于，所述的組織篩選方法包含以下步驟：

步驟1，分別取胰腺癌病人臨床組織PDAC、與其配對的正常組織PNT；

步驟2，通過色譜質譜聯用代謝組學分析方法，分析鑒定胰腺癌組織與正常組織之間的初步差異性代謝物；

步驟3，通過質譜成像可視化示出所述的初步差異性代謝物的空間分布，找到胰腺癌組織區域中異常分布的代謝物；

步驟4，對所述的異常分布的代謝物進行輔助篩選：基于組織活檢，構建基于代謝組學的胰腺癌診斷Lasso模型，從所述的異常分布的代謝物中篩選出胰腺癌組織中的早期診斷標志物。

2.如權利要求1所述的胰腺癌早期診斷標志物的組織篩選方法，其特征在于，步驟2中，所述的色譜質譜聯用代謝組學是導電聚合物噴霧電離質譜CPSI-MS聯用代謝組學。

3.如權利要求1所述的胰腺癌早期診斷標志物的組織篩選方法，其特征在于，步驟2中，所述的分析鑒定胰腺癌組織與正常組織之間的初步差異性代謝物包含以下步驟：

步驟2.1，以VIP大于1.0為標準保留樣本離子；

步驟2.2，對步驟2.1中得到的樣本離子進行T檢驗，以FDR0.05為標準進一步保留樣本離子；

步驟2.3，對步驟2.2中得到的樣本離子進行差異倍數分析，以差異倍數大于2.0或小于0.5為標準再進一步保留樣本離子；

步驟2.4，將步驟2.3得到的樣本離子與代謝組數據庫進行比對，得到組織中76種初步差異性代謝物。

4.如權利要求1所述的胰腺癌早期診斷標志物的組織篩選方法，其特征在于，步驟3中，所述的質譜成像技術為解吸電噴霧電離質譜成像DESI-MSI，可視化示出每個所述的初步差異性代謝物的空間分布圖進行原位驗證。

5.如權利要求1所述的胰腺癌早期診斷標志物的組織篩選方法，其特征在于，步驟4中，所述的輔助篩選包含以下步驟：

步驟4.1，將n＝150個組織樣本點作為訓練集，n＝90個組織樣本點作為測試集，用于評估預先訓練的Lasso模型的表現；

步驟4.2，將所述的76種初步差異性代謝物納入Lasso分類器訓練集的初始輸入變量，只有對分類有貢獻的變量被賦予非零權重，當只保留76個變量中的22個時，Lasso分類器的性能在測試集上達到最高的準確率；

步驟4.3，引用受試者工作特征ROC曲線來評價Lasso模型的最佳診斷性能，以ROC曲線上真實陽性率最高、假陽性率最低為截斷點，得到最佳診斷性能，表明CPSI-MS數據采集結合Lasso模型能夠作為與組織活檢互補的潛在體外診斷策略。

6.如權利要求1-5中任意一項所述的胰腺癌早期診斷標志物的組織篩選方法所得到的胰腺癌早期診斷標志物，其特征在于，所述的胰腺癌早期診斷標志物包含：甘油二酯、1-正丁胺、胞苷、組胺、磷酸膽堿、羥基亞麻酸、亞油酸、3-磷酸甘油、谷氨酸、丙烯酰肉堿、谷氨酰胺、酪氨酸、3-羥基棕櫚酸、溶血磷脂膽堿、丁酰肉堿、哌啶甲酸、溶血磷脂膽堿、乙酰精胺、乳酸、組氨酸、N-甲基組胺、N-乙酰組胺中的任意一種或者任意兩種以上的組合。

7.如權利要求6所述的胰腺癌早期診斷標志物在制備胰腺癌早期診斷試劑或試劑盒中的應用。

8.一種胰腺癌早期診斷的試劑，其特征在于，所述的試劑能夠檢測樣本中權利要求6所述的早期診斷標志物的表達水平。

9.如權利要求8所述的胰腺癌早期診斷的試劑，其特征在于，所述的樣本為組織樣本。

10.一種胰腺癌早期診斷的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒含有早期診斷標志物用于制備胰腺癌早期鑒別的診斷試劑。