[發明專利]一種核酸適體及其應用

在審

• 申請號: 202210058295.2
• 申請日: 2022-01-19
• 公開（公告）號: CN114317545A
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 于涵洋;閆超;王瑤;張楊
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;C12Q1/6886;A61K45/00;A61K47/26;A61K47/54;A61K49/00;A61P13/10;A61P35/00
• 代理公司: 北京智丞瀚方知識產權代理有限公司 11810
• 代理人: 白月霞

本發明涉及一種核酸適體及其應用，所述核酸適體為能夠特異性地識別膀胱腫瘤細胞，并且能夠內化進入膀胱腫瘤細胞內的核酸適體。該核酸適體的特異性、內化力以及穩定性均好，可以用作檢測及標記腫瘤細胞的分子工具，還可將該靶向性較強的核酸適體與具有治療效果的藥物結合應用，可定向作用于腫瘤細胞中，提高對腫瘤細胞的治療效果，減少了目前抗腫瘤藥物特異性不強而導致的毒副作用，綜合應用前景佳。

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，具體涉及一種核酸適體、能夠轉錄所述核酸適體的基因分子及該核酸適體的應用。

背景技術

膀胱尿路上皮癌是泌尿系統中常見的惡性腫瘤之一，膀胱癌分為非肌層浸潤性膀胱癌(淺表性)和肌層浸潤性膀胱癌，其中淺表性膀胱癌約占75％-80％。目前臨床的治療手段主要為手術切除，繼而輔助進行藥物灌注化療。表阿霉素 (Epirubicin，EPI)是常用的化療藥物之一，因其分子量小(MW：543.52)，極易進入細胞，所以被用于多種癌癥的治療。但是表阿霉素缺少靶向性，無法有效地區分腫瘤組織和正常組織，在殺死癌細胞的同時也會破壞正常細胞，有明顯的毒副作用。為了解決這個問題，研究者們將藥物與抗體偶聯，構建抗體藥物偶聯物(Antibody-drug conjugate，ADCs)，試圖提高藥物的靶向性。抗體藥物偶聯物是通過一個化學連接將具有生物活性的小分子藥物連接到單抗上，利用單抗特異結合細胞表面靶標蛋白的特性，將小分子藥物靶向運輸到目標細胞中。這種聯用的方式也存在一些缺陷：1)引入的抗體多是基于癌細胞表面的標志物，目前這種標志物還比較少，所以可供選用的抗體種類也很少；2)抗體的制備過程比較繁瑣，而且熱穩定差，在后續修飾藥物的過程中存在降解的風險；3)抗體的分子量比較大，藥物分子量比較小，偶聯后存在藥物分子失效的可能；4)抗體藥物偶聯物進入細胞后，可能會產生免疫原性。介于以上的情況，臨床施藥亟需我們找到新的方式。

核酸適體是一種由幾十個核苷酸組成的單鏈核酸分子，對靶標有明顯的選擇性，可以與蛋白質、金屬離子、有機小分子、多肽甚至整個細胞進行高親和力和特異性的結合。由于核酸適體(aptamer)具有與抗體類似的特異結合靶標的性質，又有“化學抗體”之稱。與傳統的抗體相比，核酸適體有諸多優勢：1) 在序列確定后，可以直接通過化學合成制備，成本低，過程簡單；2)分子量小，免疫原性低；3)可以引入非天然核苷酸，提高序列的生物學及熱力學穩定性；抗核酸酶降解、耐高溫的能力；4)容易進行化學修飾，可以做多種標記等。

核酸適體的應用能夠擺脫細胞表面癌癥標志物的限制，盡可能保留癌細胞的自然狀態，因此，其可能是一個新的研究和應用熱點，在藥物檢測和治療等領域極具應用前景。目前已經有研究者的實驗室逐漸研究出了一些親和力高、特異性較好的核酸適體分子，但其僅為初步研究。最重要的是，目前針對膀胱癌細胞的核酸適體的研究仍是空白，亟需我們做一些努力，將核酸適體引入到膀胱癌的治療中。

發明內容

本發明針對現有技術的缺陷提供了一種核酸適體、能夠轉錄所述核酸適體的基因分子及該核酸適體的應用，旨在克服現有技術中的不足。

本發明的目的是通過以下技術方案來實現：

本發明的一個發明點為提供一種新型的核酸適體，其為能夠特異性地識別膀胱癌細胞，并且能夠內化進入膀胱癌細胞內的核酸適體，所述核酸適體的長度為20-1000bp。

進一步地，所述核酸適體中的部分堿基能夠配對成為局部雙鏈結構，如部分堿基C和堿基G能夠配對成為雙鏈。

進一步地，所述核酸適體包括第一序列，所述第一序列為含有seq1的序列或與該seq1序列80％以上同源的序列；該同源的序列包括在seq1基礎上增加堿基、減少堿基、替換其中任意一個或幾個堿基，此處的幾個包括兩個及兩個以上數量的堿基。該第一序列可以特異性識別并內化進入膀胱腫瘤細胞，并且其具有極高的特異性和內化能力。

上述的seq1為5’-CCAGUGAAGCGUCCUGGAGAUGGAUGUUGUG AUGG-3’。