[發明專利]一種降低或消除重組蛋白CEX酸性峰的方法

有效

• 申請號: 202210057229.3
• 申請日: 2022-01-19
• 公開（公告）號: CN114085291B
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 湯玉環;董無善;歐陽子均;李綱
• 申請（專利權）人: 邁威（上海）生物科技股份有限公司
• 主分類號: C07K16/46
• 分類號: C07K16/46;C07K1/18
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種降低或消除重組蛋白陽離子交換色譜（CEX）酸性峰的方法，其特征在于將已經過純化、CEX鑒定仍存在酸性峰的重組蛋白進一步采用以NM90-Agarose^TMHAM為填料的復合型離子交換層析進行分離，載量≤60 mg/mL，洗脫pH為pH 4.75±0.05，去除所述重組蛋白的酸性變異體；

其中，所述重組蛋白分子中含有GS連接子，所述重組蛋白的酸性變異體是由所述GS連接子絲氨酸殘基上以木糖為核心的O-糖基化修飾產生的-Xyl(PO3)-Gal-Gal-GlcA結構和-Xyl(PO3)-Gal結構，所述重組蛋白包含有如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

2.如權利要求1所述降低或消除重組蛋白陽離子交換色譜（CEX）酸性峰的方法，其特征在于所述GS連接子由式(GS)n表示，其中n為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12。

3.如權利要求1所述降低或消除重組蛋白陽離子交換色譜（CEX）酸性峰的方法，其特征在于所述GS連接子由式(GGGGS)n表示，其中n為1、2、3、4或5。

4.如權利要求1所述降低或消除重組蛋白陽離子交換色譜（CEX）酸性峰的方法，其特征在于所述重組蛋白包括一個或多個選自下組的元件：Fc、F(ab’)2、Fab、ScFv、sdAb。

5.如權利要求1所述降低或消除重組蛋白陽離子交換色譜（CEX）酸性峰的方法，其特征在于所述重組蛋白為重組抗NKG2A/PD-L1雙特異性抗體。

6.如權利要求1所述降低或消除重組蛋白陽離子交換色譜（CEX）酸性峰的方法，其特征在于所述重組蛋白是由哺乳動物細胞系統表達，所述純化包括親和層析純化。

7.如權利要求1所述降低或消除重組蛋白陽離子交換色譜（CEX）酸性峰的方法，其特征在于所述重組蛋白是以CHO為宿主細胞表達、經過親和層析純化的重組雙特異性抗體。

8.復合型離子交換層析在去除重組蛋白的酸性變異體中的應用，其中，所述重組蛋白的酸性變異體是由絲氨酸殘基上以木糖為核心的O-糖基化修飾產生的-Xyl(PO3)-Gal-Gal-GlcA結構和-Xyl(PO3)-Gal結構，所述復合型離子交換層析采用NM90-Agarose^TMHAM作為填料。