[發(fā)明專利]LAMP檢測(cè)OXA48家族基因的引物組合物、試劑盒及檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210055981.4
• 申請(qǐng)日: 2022-01-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114350761A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-04-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉金霞;楊思煕;任立群;李冉;王麗娜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 承德醫(yī)學(xué)院
• 主分類號(hào): C12Q1/6844
• 分類號(hào): C12Q1/6844;C12Q1/689;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 鄭州慧廣知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 41160
• 代理人: 朱廣存

1.一種LAMP檢測(cè)耐碳青霉烯酶陰溝腸桿菌OXA48家族基因的引物組合物，其特征在于：所述的LAMP引物組合物包括：

正向外引物F3：如SEQ ID NO：1所示，

反向外引物B3：如SEQ ID NO：2所示；

正向內(nèi)引物FIP：如SEQ ID NO：3所示；

反向內(nèi)引物BIP：如SEQ ID NO：4所示；

正向環(huán)引物L(fēng)F：如SEQ ID NO：5所示；

反向環(huán)引物L(fēng)B：如SEQ ID NO：6所示。

2.一種用于檢測(cè)耐碳青霉烯酶陰溝腸桿菌OXA48家族基因的LAMP試劑盒，其特征在于：包括如權(quán)利要求1所述的LAMP檢測(cè)耐碳青霉烯酶陰溝腸桿菌OXA48家族基因的引物組合物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的LAMP試劑盒，其特征在于：所述LAMP檢測(cè)耐碳青霉烯酶陰溝腸桿菌OXA48家族基因的引物組合物包括0.2μM正向外引物F3，0.2μM反向外引物B3，1.6μM正向內(nèi)引物FIP，1.6μM反向內(nèi)引物BIP，0.4μM正向環(huán)引物L(fēng)F，0.4μM反向環(huán)引物L(fēng)B。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的LAMP試劑盒，其特征在于：還包括LAMP反應(yīng)擴(kuò)增液。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的LAMP試劑盒，其特征在于：所述LAMP反應(yīng)擴(kuò)增液包括0.2M甜菜堿、6mM MgSO4、1.4mM dNTPs、8U Bst DNA聚合酶、2.5μl的10×buffer、1μl模板DNA、0.05mM鈣黃綠素、0.6mM MnCl2、7.1μl無(wú)菌ddH20。

6.一種LAMP檢測(cè)耐碳青霉烯酶陰溝腸桿菌OXA48家族基因的方法，其特征在于，利用權(quán)利要求2-5任一項(xiàng)所述的LAMP試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的LAMP檢測(cè)耐碳青霉烯酶陰溝腸桿菌OXA48家族基因的方法，其特征在于，按照如下的步驟順序進(jìn)行：

(1)在反應(yīng)管中加入0.2μM正向外引物F3、0.2μM反向外引物B3、1.6μM正向內(nèi)引物FIP、1.6μM反向內(nèi)引物BIP、0.4μM正向環(huán)引物、0.4μM反向環(huán)引物、0.2M甜菜堿、6mM MgSO4、1.4mMdNTPs、8U Bst DNA聚合酶、2.5μl的10×buffer、1μl模板DNA、0.05mM鈣黃綠素、0.6mMMnCl2、7.1μl無(wú)菌ddH20，并將反應(yīng)管置于恒溫水浴鍋中；

(2)將步驟(1)的反應(yīng)管置于冰盒上終止反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)管中顏色變化判斷擴(kuò)增結(jié)果。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的LAMP檢測(cè)耐碳青霉烯酶腸桿菌OXA48家族基因的方法，其特征在于：所述恒溫水浴箱的溫度63-67℃，反應(yīng)時(shí)間為25-30分鐘。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的LAMP檢測(cè)耐碳青霉烯酶腸桿菌OXA48家族基因的方法，其特征在于：所述恒溫水浴箱的溫度為65℃，反應(yīng)時(shí)間為25-30分鐘。