[發(fā)明專利]肝樣細胞和人工肝組織的制備方法以及應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210049108.4
• 申請日: 2022-01-17
• 公開（公告）號: CN116478904A
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發(fā)明（設計）人: 陳漢輝;鄧帥
• 申請（專利權）人: 香港中文大學
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N5/0735;C12Q1/02;A61L27/38;A61K35/407;A61P1/16
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產(chǎn)權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

1.將多能干細胞誘導為肝樣細胞團的方法，其包括將多能干細胞封裝在第一微凝膠中進行分化培養(yǎng)，得到所述肝樣細胞團。

2.如權利要求1所述的方法，其中所述多能干細胞為胚胎干細胞或誘導性多能干細胞。

3.如權利要求1或2所述的方法，其中所述第一微凝膠包含膠原蛋白，優(yōu)選為Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅴ型或Ⅺ型膠原蛋白，更優(yōu)選為Ⅰ型膠原蛋白。

4.如權利要求1-3中任一項所述的方法，其中所述第一微凝膠的大小為80-120μm，優(yōu)選為約100μm；和/或

所述第一微凝膠包含10-20個所述多能干細胞，優(yōu)選包含10個所述多能干細胞。

5.如權利要求1-4中任一項所述的方法，其中所述培養(yǎng)的時間為至少17天。

6.如權利要求1-5中任一項所述的方法，其中所述培養(yǎng)包括以下階段：

分化為定形內胚層的階段，優(yōu)選地使用定形內胚層分化培養(yǎng)基培養(yǎng)所述第一微凝膠，獲得包含定形內胚層的微凝膠；

分化為肝母細胞團的階段，優(yōu)選地使用含有二甲基亞砜的培養(yǎng)基培養(yǎng)所述包含定形內胚層的微凝膠，獲得包含肝母細胞團的微凝膠；

肝母細胞團進一步分化和成熟的階段，優(yōu)選地使用維持肝細胞表型表達的培養(yǎng)基培養(yǎng)所述包含肝母細胞團的微凝膠以獲得肝樣細胞團。

7.肝樣細胞團，其通過權利要求1-6中任一項所述的方法制備；

優(yōu)選地，所述肝樣細胞團中的肝細胞具有以下特征中的至少一種：

具有雙核結構；

具有貯存糖原和脂肪的功能；

能夠分泌尿素和白蛋白；

具有低水平的AFP基因表達；

具有高水平的ARG1、ALB、CYP3A4、CYP1A2、AAT和TAT基因表達；和/或

表現(xiàn)出肝細胞極性。

8.人工肝組織的制備方法，其包括將通過權利要求1-6中任一項所述的方法制備的肝樣細胞團或權利要求7所述的肝樣細胞團與其它功能細胞封裝在第二水凝膠中進行培養(yǎng)，得到所述人工肝組織；

優(yōu)選地，所述其它功能細胞為血管內皮細胞或其它肝臟細胞；更優(yōu)選地，所述血管內皮細胞為人臍靜脈血管內皮細胞或多能干細胞誘導得到的血管內皮細胞；和/或所述其它肝臟細胞為肝巨噬細胞或肝星狀細胞；和/或

所述第二水凝膠包含纖維蛋白和/或凝血酶。

9.人工肝組織，其通過權利要求8所述的方法制備。

10.權利要求7所述的肝樣細胞團或權利要求9所述的人工肝組織在制備用于治療肝臟相關疾病的產(chǎn)品、藥物篩選、毒性測定或再生醫(yī)學中的用途。