[發明專利]一種雙峰駝的精液冷凍方法

在審

• 申請號: 202210048717.8
• 申請日: 2022-01-17
• 公開（公告）號: CN114304138A
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 何牧仁;其其格;孟克巴依爾;朱莉仙;郭少平;聶慧;烏力吉;張智文
• 申請（專利權）人: 阿拉善盟畜牧獸醫技術推廣中心（阿拉善盟動物疫病預防控制中心）
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京知呱呱知識產權代理有限公司 11577
• 代理人: 朱芳

本發明公開了一種雙峰駝的精液冷凍方法，包括：采集的精液與液化液按照1:1稀釋，保存在37℃恒溫箱中使其充分液化；取充分液化后的精液進行鏡檢，評定精子活力；精子活力合格的精液離心處理，棄去上清液；加冷凍液，與棄去上清液的精液充分混合；將與冷凍液充分混合的精液分裝在多個0.5mL的細管中；把裝有精液的細管放入避光容器中，緩慢降溫至4℃平衡；平衡后的精液放入4℃的冷凍架上；裝有精液的細管置于液氮面上方熏蒸，然后將細管放入液氮液中冷凍。利用液氮之前精液多在37℃或4℃左右的環境中，不會使精子活性下降，而在將精液放入液氮液(裝有精液的細管放入液氮液中)后即可實現精液的冷凍，從而保證精子活性。

技術領域

本發明涉及人工授精技術領域，具體涉及一種雙峰駝的精液冷凍方法。

背景技術

雙峰駝是國家Ⅰ級重點保護動物，列入《中國物種紅色名錄》和《世界自然保護聯盟瀕危物種紅色名錄》，目前有野生雙峰駝和家養雙峰駝。由于繁殖速度較慢，世界范圍內的野生雙峰駝的種群數量仍在繼續下降。我國的家養雙峰駝主要分布在西北和華北北部等區域，主要采用人工受精技術保證家養雙峰駝的繁殖速度。目前關于雙峰駝人工采精后的精液冷凍技術披露極少，傳統的雙峰駝精液冷凍方法會影響到精子活力，并且出現頭對頭現象。亟需研究出一種新的關于雙峰駝的人工采精后的精液冷凍方法，不影響精子活力。

發明內容

為此，本發明提供一種雙峰駝的精液冷凍方法，以解決上述的技術問題。

為了實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種雙峰駝的精液冷凍方法，包括：

采集的精液與液化液按照1:1稀釋，保存在37℃恒溫箱中一段時間，期間不斷用移液器輕輕抽取混合液使其充分液化；

取充分液化后的精液進行鏡檢，評定精子活力；

精子活力合格的精液離心處理，棄去上清液；

加冷凍液，與棄去上清液的精液充分混合；

將與冷凍液充分混合的精液分裝在多個0.5mL的細管中，并封閉細管的端口；

把裝有精液的細管放入避光容器中，緩慢降溫至4℃，平衡一段時間；

平衡后的精液放入4℃的冷凍架上；

裝有精液的細管置于液氮面上方熏蒸一段時間，然后將細管放入液氮液中冷凍。

進一步地，精液稀釋前，將需與精液接觸的器皿以及液化液放在37℃恒溫箱中備用，將冷凍液置于室溫備用。

進一步地，精液稀釋前，將采集的精液進行鏡檢；鏡檢合格的精液與液化液按照1:1稀釋，然后保存在37℃恒溫箱中30min，期間不斷用移液器輕輕抽取混合液使其充分液化；每隔5分鐘，觀察液化情況，待完全液化，用血細胞計觀察精子濃度。

進一步地，評定精子活力時，取一滴充分液化的精液于載玻片上，加蓋蓋玻片后在38℃恒溫裝置的顯微鏡上評定活力。

進一步地，離心處理時，對精子活力合格的精液離心處理10min。

進一步地，所述液化液包括9.6mLTCF溶液和0.4mL蛋黃，其中，TCF包括36.34gTris、19.89g檸檬酸、5g果糖、2.92gEDTA、0.5gBSA、10萬單位青霉素、10萬單位鏈霉素和800mL超純水。

進一步地，加冷凍液時，根據精液密度按比例加入冷凍液A，用移液器緩慢抽取混合液使精液充分與冷凍液A混合，置于4-5℃環境中平衡2h；然后加入冷凍液B，充分混勻，其中，冷凍液A和冷凍液B的比例為1:1。