[發明專利]一種雙峰駝的精液冷凍方法

在審

• 申請號: 202210048717.8
• 申請日: 2022-01-17
• 公開（公告）號: CN114304138A
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 何牧仁;其其格;孟克巴依爾;朱莉仙;郭少平;聶慧;烏力吉;張智文
• 申請（專利權）人: 阿拉善盟畜牧獸醫技術推廣中心（阿拉善盟動物疫病預防控制中心）
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京知呱呱知識產權代理有限公司 11577
• 代理人: 朱芳

1.一種雙峰駝的精液冷凍方法，其特征在于，包括：

采集的精液與液化液按照1:1稀釋，保存在37℃恒溫箱中一段時間，期間不斷用移液器輕輕抽取混合液使其充分液化；

取充分液化后的精液進行鏡檢，評定精子活力；

精子活力合格的精液離心處理，棄去上清液；

加冷凍液，與棄去上清液的精液充分混合；

將與冷凍液充分混合的精液分裝在多個0.5mL的細管中，并封閉細管的端口；

把裝有精液的細管放入避光容器中，緩慢降溫至4℃，平衡一段時間；

平衡后的精液放入4℃的冷凍架上；

裝有精液的細管置于液氮面上方熏蒸一段時間，然后將細管放入液氮液中冷凍。

2.根據權利要求1所述的雙峰駝的精液冷凍方法，其特征在于，精液稀釋前，將需與精液接觸的器皿以及液化液放在37℃恒溫箱中備用，將冷凍液置于室溫備用。

3.根據權利要求1所述的雙峰駝的精液冷凍方法，其特征在于，精液稀釋前，將采集的精液進行鏡檢；鏡檢合格的精液與液化液按照1:1稀釋，然后保存在37℃恒溫箱中30min，期間不斷用移液器輕輕抽取混合液使其充分液化；每隔5分鐘，觀察液化情況，待完全液化，用血細胞計觀察精子濃度。

4.根據權利要求1所述的雙峰駝的精液冷凍方法，其特征在于，評定精子活力時，取一滴充分液化的精液于載玻片上，加蓋蓋玻片后在38℃恒溫裝置的顯微鏡上評定活力。

5.根據權利要求1所述的雙峰駝的精液冷凍方法，其特征在于，離心處理時，對精子活力合格的精液離心處理10min。

6.根據權利要求1所述的雙峰駝的精液冷凍方法，其特征在于，所述液化液包括9.6mLTCF溶液和0.4mL蛋黃，其中，TCF包括36.34gTris、19.89g檸檬酸、5g果糖、2.92gEDTA、0.5gBSA、10萬單位青霉素、10萬單位鏈霉素和800mL超純水。

7.根據權利要求1所述的雙峰駝的精液冷凍方法，其特征在于，加冷凍液時，根據精液密度按比例加入冷凍液A，用移液器緩慢抽取混合液使精液充分與冷凍液A混合，置于4-5℃環境中平衡2h；然后加入冷凍液B，充分混勻，其中，冷凍液A和冷凍液B的比例為1:1。

8.根據權利要求7所述的雙峰駝的精液冷凍方法，其特征在于，所述冷凍液A包括8mLTCF和2mL蛋黃，所述冷凍液B包括9mLTCF和1mL蛋黃；其中，TCF包括36.34gTris、19.89g檸檬酸、5g果糖、2.92gEDTA、0.5gBSA、10萬單位青霉素、10萬單位鏈霉素和800mL超純水。

9.根據權利要求1所述的雙峰駝的精液冷凍方法，其特征在于，裝有精液的細管在避光容器中降至4℃平衡10-30min。

10.根據權利要求1所述的雙峰駝的精液冷凍方法，其特征在于，裝有精液的細管置于液氮面上方4cm處熏蒸15min。