[發明專利]SOD3在調控雙氫青蒿素誘導的脾臟增大及免疫細胞異質性藥物篩選或疫苗評價中的應用

在審

• 申請號: 202210048341.0
• 申請日: 2022-01-17
• 公開（公告）號: CN114480553A
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 陳啟軍;姜寧;張義偉;李其龍;陳冉;馮穎
• 申請（專利權）人: 沈陽農業大學
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;C12Q1/6869;C12Q1/6883;G01N33/569;G01N15/10;G01N15/14;G01N21/64
• 代理公司: 遼寧沈陽國興知識產權代理有限公司 21100
• 代理人: 姜婷婷

本發明涉及一種SOD3在調控雙氫青蒿素誘導的脾臟增大及免疫細胞異質性藥物篩選或疫苗評價中的應用；本發明的意義在于：雙氫青蒿素可調控脾臟免疫細胞的異質性。SOD3^?/?小鼠用等量的雙氫青蒿素進行灌胃處理后未發現脾臟增大，脾指數也未升高。流式細胞分析發現SOD3^?/?小鼠脾臟免疫細胞亞群中CD11b⁺Gr?1⁺中性粒細胞和B220+B細胞、CD3⁺CD4⁺T細胞的比例也未發生顯著變化。因此，SOD3蛋白缺失在逆轉雙氫青蒿素誘導的脾增大及免疫細胞異質性方面有一定的作用，驗證SOD3是雙氫青蒿素作用的靶點之一。

技術領域

本發明涉及醫藥技術領域，主要涉及到SOD3蛋白缺失在緩解雙氫青蒿素誘導的脾增大及免疫細胞異質性方面的應用。

背景技術

雙氫青蒿素(DHA)，作為青蒿素的一種衍生物謝物，比青蒿素本身表現出更強的抗瘧疾作用，同時也被公認為是一種免疫調節劑。研究表明，高濃度的雙氫青蒿素可以抑制體液免疫反應，此外，雙氫青蒿素還可以抑制氧化應激以及活性氧(ROS)積累以改善炎癥。而作為主要的抗氧化酶，超氧化物歧化酶(SOD) 在清除ROS中起著至關重要的作用。大多數哺乳動物細胞含有三種形式的 SOD，即SOD1、SOD2和SOD3，它們在細胞中有不同的定位：SOD1主要存在于細胞質和線粒體內膜間隙；SOD2主要分布在線粒體基質和內膜；SOD3在信號肽的引導下定位與細胞外間隙。在細胞外環境中，SOD3催化超氧陰離子的歧化，阻止O^2-的形成，所以，SOD3在雙氫青蒿素調控的免疫反應中是否發揮重要作用，是本領域技術人員一直渴望解決的技術難題。

發明內容

本發明針對上述現有技術中存在的問題，目的在于提供SOD3蛋白缺失在緩解雙氫青蒿素誘導的脾增大及免疫細胞異質性方面的應用。

本發明的技術方案如下：

SOD3在調控雙氫青蒿素誘導的脾臟增大及免疫細胞異質性藥物篩選或疫苗評價中的應用。

所述的雙氫青蒿素在調控脾臟增大及免疫細胞異質性的檢測方法，包括如下步驟：

步驟1，將0.1g羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)加入到20mL加熱至100℃的蒸餾水中，在磁力攪拌器中攪拌3-5h，當溫度恢復至室溫時，加入0.2g雙氫青蒿素(DHA)，4℃避光連續攪拌10-12h，得到雙氫青蒿素溶液；

步驟2，給小鼠連續灌胃100mg/kg/d雙氫青蒿素溶液26天后，取小鼠脾臟；

步驟3，將小鼠脾臟置于70μm的細胞篩上，細胞篩下面放置一個50mL的離心管，用注射器尾部帶棱面研磨，同時加入預冷PBS沖洗，收集細胞懸液于 15mL的離心管中；

步驟4，上述步驟3中的細胞懸液1500rpm/min離心5min，吸去上清，留沉淀，用紅細胞裂解液裂解紅細胞，混勻后冰上靜止3min；

步驟5，上述步驟4中裂解紅細胞后的細胞懸液1500rpm/min離心5min，吸去上清，留沉淀，加入預冷5mL PBS重懸，洗滌3遍，從而制備雙氫青蒿素誘導的免疫細胞亞群懸濁液；

步驟6，使用熒光顯微鏡及血球計數板計算小鼠脾臟免疫細胞數量；

步驟7，使用流式細胞術及單細胞轉錄組測序方法測定雙氫青蒿素誘導的免疫細胞亞群的異質性。

所述的小鼠選體重18-20g的健康雌性BALB/c小鼠，所有小鼠均飼養于無特定微生物的小動物房中，保持黑暗12小時和光照12小時。

所述的步驟4中，紅細胞裂解液為155mM NH 4Cl，10mM KHCO3，0.11mM EDTA.Na2，pH 7.2。