[發(fā)明專利]一種生物酶催化制備3,4-二羥基苯乙醇的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210047546.7
• 申請(qǐng)日: 2022-01-17
• 公開（公告）號(hào): CN114350717A
• 公開（公告）日: 2022-04-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王浩;丁葉;華夏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京合谷生命生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12P7/22
• 分類號(hào): C12P7/22
• 代理公司: 南京聚匠知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32339
• 代理人: 吳亞東

1.一種生物酶催化制備3,4-二羥基苯乙醇的方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

S1、將誘導(dǎo)產(chǎn)酶的大腸桿菌發(fā)酵液進(jìn)行離心處理，離心轉(zhuǎn)速為2000～8000rpm/min，離心時(shí)間為1～10min，去除離心液，獲得菌體；

S2、向步驟S1的菌體中加入緩沖液，使菌體懸浮，移至四口燒瓶?jī)?nèi)，然后進(jìn)行磁力攪拌，攪拌轉(zhuǎn)速為200～1200rpm/min，并進(jìn)行水浴加熱，加熱溫度為25～45℃，接著向菌體懸浮液中通入氧氣，實(shí)時(shí)控制pH；

S3、稱取對(duì)羥基苯乙醇底物，并用少量緩沖液進(jìn)行溶解混合均勻，后分多次加入四口燒瓶分內(nèi)，并持續(xù)攪拌進(jìn)行反應(yīng)，后使用高效液相檢測(cè)反應(yīng)液中的對(duì)羥基苯乙醇底物，當(dāng)反應(yīng)液內(nèi)沒有對(duì)羥基苯乙醇底物時(shí)，停止攪拌并關(guān)閉通氣，使反應(yīng)停止，獲得3,4-二羥基苯乙醇產(chǎn)物的反應(yīng)液，反應(yīng)液冷藏保存；

S4、采用高效液相色譜檢測(cè)分析步驟S3中反應(yīng)液中的3,4-二羥基苯乙醇產(chǎn)物，獲得3,4-二羥基苯乙醇的產(chǎn)量，達(dá)到13g/L以上，并獲得3,4-二羥基苯乙醇的轉(zhuǎn)化率，達(dá)到99％以上。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物酶催化制備3,4-二羥基苯乙醇的方法，其特征在于，所述對(duì)羥基苯乙醇的添加總質(zhì)量≤13.9g，且對(duì)羥基苯乙醇的添加總量控制在12.0～12.5g/L，所述對(duì)羥基苯乙醇的添加總量＝對(duì)羥基苯乙醇的添加總質(zhì)量/緩沖液的總體積。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種生物酶催化制備3,4-二羥基苯乙醇的方法，其特征在于，每次對(duì)羥基苯乙醇的添加量為0.5～5g/30min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物酶催化制備3,4-二羥基苯乙醇的方法，其特征在于，所述菌體的生物量為15～45g/m³。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物酶催化制備3,4-二羥基苯乙醇的方法，所述緩沖液為PB緩沖液、PBS緩沖液或TRIS緩沖液的一種。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物酶催化制備3,4-二羥基苯乙醇的方法，所述通氧量為0.5～5L/min。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物酶催化制備3,4-二羥基苯乙醇的方法，所述pH值為5.5～8.5。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物酶催化制備3,4-二羥基苯乙醇的方法，其特征在于，所述大腸桿菌發(fā)酵液為大腸桿菌MG1655發(fā)酵液、大腸桿菌BL21(DE3)發(fā)酵液或大腸桿菌BMGA發(fā)酵液的一種。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物酶催化制備3,4-二羥基苯乙醇的方法，所述冷藏保存的溫度為4℃。