[發明專利]一種血液中轉甲狀腺素蛋白(TTR)四聚體濃度測定的預處理方法和檢測方法

有效

• 申請號: 202210043426.X
• 申請日: 2022-01-14
• 公開（公告）號: CN114324693B
• 公開（公告）日: 2023-01-13
• 發明（設計）人: 劉宇;曹云峰;崔麗;關麗萍;劉明莉;崔雪婷;高鵬
• 申請（專利權）人: 大連博源醫學科技有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/14;G01N30/88;G01N30/86
• 代理公司: 北京中和立達知識產權代理有限公司 11756
• 代理人: 張可

1.一種血液中轉甲狀腺素蛋白(TTR)四聚體濃度測定的檢測方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

將血液樣品進行預處理獲得待測液，隨后將待測液采用高效液相色譜或超高效液相色譜進行分析，通過校準曲線計算血液樣本中TTR四聚體的濃度，其中所述預處理的步驟為：

（1）血液過濾膜，加入小分子熒光探針，進行孵育；

（2）加入稀釋劑進行稀釋；

（3）離心，取上清液，作為待測液；

其中，所述高效液相色譜或超高效液相色譜條件為：色譜柱為強陰離子交換柱或SEC色譜柱，柱溫為30-50 ℃，進樣器溫度為10-20 ℃，流動相A為含乙二胺四乙酸（EDTA）的Tris-HCl緩沖體系，流動相B為含氯化鈉（NaCl）和乙二胺四乙酸（EDTA）的Tris-HCl緩沖體系；所述Tris-HCl緩沖體系的PH為7-9；EDTA的濃度為500 μmol/L-2 mmol/L；NaCl的濃度為500mmol/L-2 mol/L，流動相流速0.3-1 mL/min；梯度洗脫；進樣量：5-50 μL；

其中，所述梯度洗脫參數為：

第0 min～3 .00 min：流動相B：24 %；

第3.00 min～5.00 min，流動相B：24 %～32 %；

第5.00 min～12.00 min，流動相B：32 %～38 %；

第12.10 min～14.00 min，流動相B：100 %；

其中，上述條件涉及分析時間、流動相A和B的體積百分比的各個數值參數的浮動范圍為該數值參數± 20 %；

其中，所述液相色譜所用檢測器為熒光檢測器，激發波長λ_ex=278-378 nm，發射波長λ_em=380-480 nm，以1-10點/秒的采樣率監測，

其中，在所述預處理方法中，步驟(1)所述小分子熒光探針包括二苯乙烯類似物或1,3,4-惡二唑磺酰氟類似物，其中，小分子熒光探針濃度為300 μmol/L-3 mmol/L，小分子熒光探針和血液的體積比為1:(1-20)。

2. 根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述預處理方法中，其中，步驟(1)中濾膜為PVDF膜、Nylon濾膜、混合纖維素酯濾膜、聚丙烯濾膜、PES、PTFE濾膜，直徑為0.22 μm-0.45 μm。

3. 根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述預處理方法中，其中，步驟(1)中孵育是通過鼓風干燥箱，恒溫混勻儀或水浴鍋進行，孵育溫度為20-30℃；孵育的時間為0.1-3 h。

4.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述預處理方法中，其中，步驟(2)中稀釋劑為初始流動相或pH為5-10的PBS溶液，稀釋劑與血液的體積比為(1-10):1。

5. 根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述預處理方法中，其中，步驟(3)中離心力為10000-15000 g，時間為5-15 分鐘，溫度為4-10 ℃。