[發(fā)明專利]一種高效降解麩質(zhì)蛋白的多酶復(fù)合體及其應(yīng)用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202210042110.9 | 申請日： | 2022-01-14 |
| 公開（公告）號： | CN114438044A | 公開（公告）日： | 2022-05-06 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 陳紅兵;袁娟麗;蘆軍;武涌;高金燕;李欣;佟平;孟軒夷;謝彥海 | 申請（專利權(quán)）人： | 南昌大學(xué) |
| 主分類號： | C12N9/00 | 分類號： | C12N9/00;C12N1/20;A61K38/54;A61P1/00;A23L5/20;A23L33/195;C12R1/085 |
| 代理公司： | 南昌金軒知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 36129 | 代理人： | 石紅麗 |
| 地址： | 330000 江西省*** | 國省代碼： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 高效 降解 蛋白 復(fù)合體 及其 應(yīng)用 | ||
本發(fā)明提供了一種高效降解麩質(zhì)蛋白的多酶復(fù)合體，該多酶復(fù)合體是一種來源于蠟樣芽孢桿菌AFA01的多酶復(fù)合體。該多酶復(fù)合體不僅能高效降解麩質(zhì)蛋白，還能高效降解致乳糜瀉肽，破壞其中的T細胞表位。本發(fā)明多酶復(fù)合體制備的酶制劑不僅能作為口服酶制劑輔助人體消化麩質(zhì)蛋白，用于輔助治療乳糜瀉；還能用于食品加工中，更有效的降解麩質(zhì)蛋白，有望為乳糜瀉患者提供安全可靠的低致敏食品。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及酶制劑和食品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高效降解麩質(zhì)蛋白的多酶復(fù)合體及其應(yīng)用。
背景技術(shù)
小麥是世界上廣泛種植的糧食作物，同時也是FAO(1995)報告的八類常見的食入性過敏源之一。它可以引起多種麩質(zhì)蛋白相關(guān)性疾病，其中乳糜瀉就是由麩質(zhì)蛋白引起的一種慢性小腸炎癥疾病，在全球的發(fā)病率約為1％。乳糜瀉已經(jīng)嚴重影響了部分人群的生活質(zhì)量，甚至危及生命，已成為全球性不可回避的食品安全問題之一。
乳糜瀉尚無特效的治療方法，唯一可靠的治療方式是終生嚴格的無麩質(zhì)飲食。因此，低致敏的小麥產(chǎn)品的加工制備備受重視。目前，常用的脫敏技術(shù)包括物理法、化學(xué)法、基因工程法和酶處理法等。物理加工是脫敏常用的方法，但很難有效的降低小麥蛋白的致敏性；由于化學(xué)試劑的影響，使得化學(xué)方法的使用存在一定的局限性；酶處理法因其高效、環(huán)保等優(yōu)點越來越受到重視。
然而麩質(zhì)蛋白富含脯氨酸和谷氨酰胺，使得麩質(zhì)蛋白難以被徹底水解，而形成能引起乳糜瀉的毒性肽，如p31-43和33mer等，故而尋找能高效降解麩質(zhì)蛋白和麩質(zhì)蛋白毒性肽的微生物和酶成了研究重點。
發(fā)明內(nèi)容
針對背景技術(shù)中麩質(zhì)蛋白難以被徹底水解的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種高效降解麩質(zhì)蛋白的多酶復(fù)合體及其應(yīng)用。本發(fā)明制備的蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)多酶復(fù)合體能夠高效降解麩質(zhì)蛋白和致乳糜瀉肽，對于治療或預(yù)防麩質(zhì)蛋白相關(guān)疾病如乳糜瀉具有重要意義。
一種高效降解麩質(zhì)蛋白的多酶復(fù)合體，所述多酶復(fù)合體是由蠟樣芽孢桿菌AFA01發(fā)酵制得。
優(yōu)選地，所述蠟樣芽孢桿菌AFA01于2020年11月05日保藏在位于北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏編號為CGMCCNo.21108。
優(yōu)選地，所述高效降解麩質(zhì)蛋白的多酶復(fù)合體制備發(fā)酵包括如下步驟：
S1：將蠟樣芽孢桿菌AFA01接種在培養(yǎng)基上，收集菌體并重懸菌體；
S2：將S1所得菌體超聲，然后加入CHAPs控制其終含量，靜置并離心取上清液；
S3：將S2所得菌體裂解液上清液上樣至DEDA FF陰離子交換柱，用NaCl進行梯度洗脫，收集活性組分；
S4：將S3所得活性組分上樣至Sephacryl S-300HR柱，洗脫并收集活性組分；
S5：將S4得到的麩質(zhì)蛋白水解活性組分冷凍干燥，即為多酶復(fù)合體。
優(yōu)選地，S1所述培養(yǎng)基為SCB固體培養(yǎng)基：淀粉10g/L、酪蛋白3g/L、KNO3 2g/L、NaCl 2g/L、K2HPO4 2g/L、MgSO4 0.05g/L、CaCl2 0.02g/L、FeSO4 0.01g/L；pH值為7.2。
優(yōu)選地，S1所述重懸采用pH 7.5-8.5的50mM Tris-HCl。
優(yōu)選地，S2所述超聲懸浮至冰上進行，超聲條件為：頻率100-500W、超聲總時間10-20min，每間隔2-10s超聲1-5s。
優(yōu)選地，S2所述靜置為4℃下放置0.5-2h，所述離心為12000g離心10min。
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