[發明專利]一種高效降解麩質蛋白的多酶復合體及其應用

在審

• 申請號: 202210042110.9
• 申請日: 2022-01-14
• 公開（公告）號: CN114438044A
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 陳紅兵;袁娟麗;蘆軍;武涌;高金燕;李欣;佟平;孟軒夷;謝彥海
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: C12N9/00
• 分類號: C12N9/00;C12N1/20;A61K38/54;A61P1/00;A23L5/20;A23L33/195;C12R1/085
• 代理公司: 南昌金軒知識產權代理有限公司 36129
• 代理人: 石紅麗

1.一種高效降解麩質蛋白的多酶復合體，其特征在于，所述多酶復合體是由蠟樣芽孢桿菌AFA01發酵制得。

2.根據權利要求1所述一種高效降解麩質蛋白的多酶復合體，其特征在于，所述蠟樣芽孢桿菌AFA01于2020年11月05日保藏在位于北京市朝陽區北辰西路1號院3號的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏編號為CGMCC No.21108。

3.根據權利要求1所述一種高效降解麩質蛋白的多酶復合體，其特征在于，所述發酵包括如下步驟：

S1：將蠟樣芽孢桿菌AFA01接種在培養基上，收集菌體并重懸菌體；

S2：將S1所得菌體超聲，然后加入CHAPs控制其終含量，靜置并離心取上清液；

S3：將S2所得菌體裂解液上清液上樣至DEDA FF陰離子交換柱，用NaCl進行梯度洗脫，收集活性組分；

S4：將S3所得活性組分上樣至Sephacryl S-300HR柱，洗脫并收集活性組分；

S5：將S4得到的麩質蛋白水解活性組分冷凍干燥，即為多酶復合體。

4.根據權利要求3所述一種高效降解麩質蛋白的多酶復合體，其特征在于，S1所述培養基為SCB固體培養基：淀粉10g/L、酪蛋白3g/L、KNO₃ 2g/L、NaCl 2g/L、K₂HPO₄ 2g/L、MgSO₄0.05g/L、CaCl₂ 0.02g/L、FeSO₄ 0.01g/L；pH值為7.2。

5.根據權利要求3所述一種高效降解麩質蛋白的多酶復合體，其特征在于，S1所述重懸采用pH 7.5-8.5的50mM Tris-HCl。

6.根據權利要求3所述一種高效降解麩質蛋白的多酶復合體，其特征在于，S2所述超聲懸浮至冰上進行，超聲條件為：頻率100-500W、超聲總時間10-20min，每間隔2-10s超聲1-5s。

7.根據權利要求3所述一種高效降解麩質蛋白的多酶復合體，其特征在于，S2所述靜置為4℃下放置0.5-2h，所述離心為12000g離心10min。

8.根據權利要求3所述一種高效降解麩質蛋白的多酶復合體，其特征在于，S3所述DEDAFF陰離子交換柱采用pH 8.5、含0.5％w/v CHAPs、20mM的Tris-HCl緩沖液平衡。

9.根據權利要求3所述一種高效降解麩質蛋白的多酶復合體，其特征在于，S4所述Sephacryl S-300HR柱采用150mM NaCl、20mM Tris-HCl平衡。

10.如權利要求1-9任一項所述的多酶復合體應用于降解麩質蛋白質。