[發明專利]犬冠狀病毒二聯熒光定量檢測試劑

在審

• 申請號: 202210036111.2
• 申請日: 2022-01-13
• 公開（公告）號: CN114354561A
• 公開（公告）日: 2022-04-15
• 發明（設計）人: 劉忠;劉青平;劉春麗;王金龍;唐妍
• 申請（專利權）人: 山東鑫諾生物工程有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N33/569;G01N33/533;G01N33/543
• 代理公司: 山東菩勤專利代理有限公司 37343
• 代理人: 邱克強

本發明提供犬冠狀病毒二聯熒光定量檢測試劑，涉及病毒檢測技術領域。該犬冠狀病毒二聯熒光定量檢測試劑，包括CPV/CCV二聯檢測試劑卡和樣本稀釋液；所述CPV/CCV二聯檢測試劑卡包括試劑卡本體和試劑卡本體上依次設置的加樣孔、結合墊、NC膜，所述結合墊中含有熒光標記的熒光微球，所述熒光微球包括偶聯犬冠狀病毒抗體的微球和偶聯犬細小病毒抗體的微球。通過采用雙抗體夾心法檢測犬類糞便中的犬細小/犬冠狀病毒濃度，將測試樣本加入到稀釋液中混勻，滴加到加樣孔內，抗原會隨著樣本稀釋液擴散到結合墊上，與熒光標記的抗體相結合，實現對犬冠狀病毒和細小病毒進行同時檢測，檢測準確，效果良好。

技術領域

本發明涉及病毒檢測技術領域，具體為犬冠狀病毒二聯熒光定量檢測試劑。

背景技術

犬冠狀病毒為單股正鏈RNA病毒，有6～7種多肽，其中4種是糖肽，不含RNA聚合酶及神經氨酸酶，犬冠狀病毒(Canine Coronavirus，CCV)是一種嚴重危害養犬業、經濟動物養殖業和野生動物保護的病毒性傳染病病源。犬細小病毒(Canine Parvovirus，CPV)是1978年澳大利亞的Kelly和加拿大的Thomson等同時從患腸炎的病犬糞便中分離獲得的，從發現該病毒，世界各地均有流行，是危害犬類的最主要的烈性傳染病之一。犬冠狀病毒常和細小病毒一起混合感染，構成犬腹瀉大流行。目前犬細小病毒病的診斷多采用膠體金法快速診斷試紙進行。此法簡便快速，準確率高。用棉簽蘸取病犬的糞便或嘔吐物浸入裝有生理鹽水的塑料管中混勻，將3～4滴上清液滴于試紙反應孔內，靜置3～5min，如C和T對應處均出現紅線為陽性。

但是傳統的膠體金法使用的樣本稀釋液無法有效稀釋動物糞便或嘔吐物，影響后續的正常檢測，無法對犬冠狀病毒和細小病毒進行同時檢測，檢測效果差。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明提供了犬冠狀病毒二聯熒光定量檢測試劑，解決了傳統的膠體金法使用的樣本稀釋液無法有效稀釋動物糞便或嘔吐物，無法對犬冠狀病毒和細小病毒進行同時檢測，檢測效果差的問題。

為實現以上目的，本發明通過以下技術方案予以實現：犬冠狀病毒二聯熒光定量檢測試劑，包括CPV/CCV二聯檢測試劑卡和樣本稀釋液；

所述CPV/CCV二聯檢測試劑卡包括試劑卡本體和試劑卡本體上依次設置的加樣孔、結合墊、NC膜，所述結合墊中含有熒光標記的熒光微球，所述結合墊與NC膜的一端相連接，所述NC膜中部設置有T線，所述NC膜的另一端設置有C線，所述加樣孔用于添加所述樣本稀釋液；

所述熒光微球包括偶聯犬冠狀病毒抗體的微球和偶聯犬細小病毒抗體的微球；

所述樣本稀釋液由以下原料組成：牛血清白蛋白1～2％、疊氮化鈉0.1～1％、聚多卡醇0.1～0.5％、檸檬酸三鈉0.2～0.55％、檸檬酸0.15～0.18％、硫氰酸胍0.1-1％、余量為純化水。

優選的，還包括移液器吸頭、棉簽，所述移液器吸頭用于將樣本稀釋液緩緩滴入于試劑卡本體的加樣孔中，所述棉簽用于樣本的采樣。

優選的，所述樣本稀釋液由以下原料組成：0.3g/mL牛血清白蛋白1-2％、0.1g/mL疊氮化鈉0.1-1％、0.2g/mL聚多卡醇0.1-0.5％、0.8g/mL檸檬酸三鈉0.2-0.55％、0.6g/mL檸檬酸0.15～0.18％、0.01～0.1g/mL硫氰酸胍0.1-1％、余量為純化水。

優選的，所述的犬冠狀病毒二聯熒光定量檢測試劑的檢測方法，包括以下步驟：

步驟一、采用雙抗體夾心法檢測犬類糞便中的犬細小/犬冠狀病毒濃度，將測試樣本加入到稀釋液中混勻，滴加到加樣孔內，抗原會隨著樣本稀釋液擴散到結合墊上，與熒光標記的抗體相結合，形成復合物；