[發明專利]非整合慢病毒載體系統在基因編輯器遞送中的應用在審

申請號：	202210031163.0	申請日：	2022-01-12
公開（公告）號：	CN114395586A	公開（公告）日：	2022-04-26
發明（設計）人：	張學禮;畢昌昊;王玉杰	申請（專利權）人：	中國科學院天津工業生物技術研究所
主分類號：	C12N15/867	分類號：	C12N15/867;C12N15/54;C12N15/38;C12N15/113;C12N15/62;C12N5/10
代理公司：	北京紀凱知識產權代理有限公司 11245	代理人：	關暢
地址：	300308 天津市濱***	國省代碼：	天津;12
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摘要：
搜索關鍵詞：	整合病毒載體系統基因編輯器遞送中的應用
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【權利要求書】：

1.非整合慢病毒載體系統在制備堿基編輯器遞送產品中的應用，所述非整合慢病毒載體系統轉染宿主細胞后能獲得非整合的慢病毒，所述非整合慢病毒載體系統包括表達堿基編輯器的重組慢病毒載體、表達整合酶的質粒和表達VSV囊膜G蛋白的質粒。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述整合酶是將HIV整合酶的第64位氨基酸由D(天冬氨酸)突變為V(纈氨酸)，保持HIV整合酶的其它氨基酸不變得到的蛋白質。

3.根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于：所述堿基編輯器為CBE堿基編輯器、ABE堿基編輯器或PE堿基編輯器中的一種或幾種；

所述CBE堿基編輯器由融合蛋白和定位系統組成，所述融合蛋白含有Cas9n蛋白和胞嘧啶脫氨酶，所述定位系統為sgRNA；所述ABE堿基編輯器由融合蛋白和定位系統組成，所述融合蛋白含有Cas9n蛋白和腺嘌呤脫氨酶，所述定位系統為sgRNA；所述PE堿基編輯器由融合蛋白和定位系統組成，所述融合蛋白含有Cas9n蛋白和逆轉錄酶，所述定位系統為pegRNA。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的應用，其特征在于：所述Cas9n為具有單條鏈切割活性的突變體Cas9(D10A)或為具有單條鏈切割活性的突變體Cas9(H840A)。

5.遞送堿基編輯器的非整合慢病毒載體的制備方法，包括下述步驟：

a)構建表達堿基編輯器的重組慢病毒載體；

b)將步驟a)的重組慢病毒載體與表達整合酶的質粒和表達VSV囊膜G蛋白的質粒轉染宿主細胞，得到重組細胞，培養所述重組細胞；

c)收獲步驟b)的培養物，從所述培養物中收集慢病毒載體顆粒，該慢病毒載體顆粒即為所述非整合慢病毒載體。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于：a)中所述堿基編輯器選自：CBE堿基編輯器、ABE堿基編輯器或PE堿基編輯器中的一種或幾種，

7.根據權利要求5或6所述的方法，其特征在于：b)中所述宿主細胞為HEK293T細胞。

8.重組細胞，其特征在于：所述重組細胞含有權利要求1-4中任一項所述應用中的所述非整合慢病毒載體系統。

9.根據權利要求8所述的細胞，其特征在于：所述細胞選自下述C1)-C3)中任一種：

C1)真核細胞；

C2)酵母細胞、植物細胞或哺乳動物細胞；

C3)人細胞。