[發(fā)明專利]一種鑒別長吻鮠遺傳性別的分子標(biāo)記及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210030085.2
• 申請日: 2022-01-12
• 公開（公告）號: CN114214433B
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅輝;葉華;周劍;李雨
• 申請（專利權(quán)）人: 西南大學(xué);四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院水產(chǎn)研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6879;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 重慶晶智匯知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 50229
• 代理人: 李靖

本發(fā)明公開了一種鑒別長吻鮠遺傳性別的Indel分子標(biāo)記，為第7號染色體第1130404位堿基處上一段長32bp的插入/缺失序列，利用特異性引物PCR擴(kuò)增后獲得長吻鮠在雌雄間的差異性產(chǎn)物，從而達(dá)到準(zhǔn)確鑒定長吻鮠性別目的。本發(fā)明可以在長吻鮠胚胎、仔稚魚、幼魚及成魚時(shí)期簡便、快速、穩(wěn)定地鑒別遺傳性別，有助于長吻鮠單性育種技術(shù)的開發(fā)，實(shí)現(xiàn)長吻鮠的全雄養(yǎng)殖，能在不增加養(yǎng)殖量的前提下大幅度提高產(chǎn)量，從而增加長吻鮠養(yǎng)殖的經(jīng)濟(jì)收益。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鑒別長吻鮠遺傳性別的分子標(biāo)記及應(yīng)用。

技術(shù)背景

硬骨魚類具有多樣、復(fù)雜的性別決定機(jī)制，魚類的性別決定分為遺傳性別決定（Genetic?sex?determination,?GSD）和環(huán)境性別決定（Eenvironmental?sexdetermination,?ESD），GSD主要是通過異型性染色體進(jìn)行判斷，如雄性異型配子XX/XY型和雌性異型配子ZW/ZZ型。然而，絕大多數(shù)的魚類的性染色體還不能通過目前的細(xì)胞遺傳學(xué)分析進(jìn)行鑒定。因此，研究者通過開發(fā)性別特異分子標(biāo)記鑒定魚類遺傳性別，目前已獲得超過30種魚類的性別特異DNA標(biāo)記，這些標(biāo)記包括擴(kuò)增片段長度多態(tài)性（Amplified?FragmentLength?Polymorphism，AFLP）、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA（Random?Amplification?PolymorphismDNA，RAPD）、微衛(wèi)星標(biāo)記?(Simple?Sequence?Repeat，SSR)、單核苷酸多態(tài)性(SingleNucleotide?Polymorphism，SNP)和苷酸序列的插入/缺失長度多態(tài)性（Insertion-deletion,?InDel）等。

長吻鮠( Leiocassis?longirostris)又名鮰魚，屬鯰形目(Siloriformes)、鲿科(Bagridae)、鮠屬( Leiocassis)，因其吻部較一般魚長，故名長吻鮠。長吻鮠肉質(zhì)細(xì)嫩、口感爽滑、且肌間刺少、營養(yǎng)豐富，民間素有“不食江團(tuán)，不知魚味”之說，其鰾十分肥厚，干制成“魚肚”是享譽(yù)中外的珍肴。長吻鮠是我國名貴淡水經(jīng)濟(jì)魚類之一，多分布于我國長江干流、通江湖泊和各大支流的下流水域。長吻鮠具有顯著的雌雄生長二態(tài)性，雄魚生長速度顯著快于雌魚，進(jìn)行全雄化養(yǎng)殖可以在不增加養(yǎng)殖量的前提下大幅度提高產(chǎn)量，開發(fā)其單性育種與單性養(yǎng)殖技術(shù)具有重要的產(chǎn)業(yè)意義。但在其性腺發(fā)育成熟之前，長吻鮠的雌魚和雄魚外部形態(tài)完全沒有區(qū)別，無法用肉眼識別雌雄個(gè)體；通過細(xì)胞遺傳學(xué)手段沒有發(fā)現(xiàn)異型性染色體，也無法通過性染色體鑒定其遺傳性別；這極大地限制了全雄化育種技術(shù)的發(fā)展。因此，急需開發(fā)一種鑒別長吻鮠遺傳性別的分子標(biāo)記用于標(biāo)記輔助育種。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種快速精準(zhǔn)鑒定長吻鮠性別的分子標(biāo)記，進(jìn)而加快長吻鮠全雄化育種進(jìn)程。

本發(fā)明的另一目的在于提供上述鑒定長吻鮠性別的檢測方法。

本發(fā)明的又一目的在于提供上述鑒定長吻鮠性別的檢測試劑盒。

本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一種鑒別長吻鮠遺傳性別的分子標(biāo)記，其特征在于：所述分子標(biāo)記為長吻鮠第7號染色體第1130404位堿基處的一段長32bp的插入/缺失的核苷酸序列，為SEQ?ID?NO.1所示，雌性個(gè)體具有SEQ?ID?NO.1序列，雄性個(gè)體缺失SEQ?ID?NO.1序列。

進(jìn)一步的，用于檢測上述分子標(biāo)記的特異性引物為：前引物F1，核苷酸序列為SEQID?NO.2所示，后引物R1，核苷酸序列為SEQ?ID?NO.3所示。

上述一種利用分子標(biāo)記鑒別長吻鮠遺傳性別的檢測方法，其特征在于：

（1）提取待測基因組DNA；