[發明專利]一種用于分子診斷的EGFR vIII重排的DNA標準品、RNA標準品及其應用在審
| 申請號： | 202210026401.9 | 申請日： | 2022-01-11 |
| 公開（公告）號： | CN114381523A | 公開（公告）日： | 2022-04-22 |
| 發明（設計）人： | 蔣濤華;傅堅剛;邵悅 | 申請（專利權）人： | 仁寬（上海）生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6886 | 分類號： | C12Q1/6886;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京睿智保誠專利代理事務所(普通合伙) 11732 | 代理人： | 周新楣 |
| 地址： | 200120 上海*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 分子 診斷 egfr viii 重排 dna 標準 rna 及其 應用 | ||
1.一種用于分子診斷的EGFRvIII重排的DNA標準品，其特征在于，所述DNA標準品的核苷酸序列如SEQ ID NO.34所示。
2.一種用于分子診斷的EGFRvIII重排的RNA標準品，其特征在于，所述RNA標準品的核苷酸序列如SEQ ID NO.42所示。
3.一種制備權利要求1所述DNA標準品或權利要求2所述RNA標準品的細胞，其特征在于，所述細胞的基因組重組有權利要求1所述的DNA標準品的核苷酸序列。
4.根據權利要求3所述的細胞，其特征在于，所述細胞以人永生化細胞系為宿主細胞；
所述宿主細胞選自HEK293、HCT116、DLD-1、RKO和SW48中的一種。
5.權利要求3或4所述的制備DNA標準品或RNA標準品的細胞的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)將針對EGFR-E1基因的1號內含子的sgRNA構建到載體pX330上，得到質粒E1-2；
(2)將針對EGFR-E7基因的7號內含子的sgRNA構建到載體pX330上，得到質粒E7-3；
(3)將質粒E1-2和質粒E7-3共同轉染宿主細胞，得重組細胞；
(4)對重組細胞進行單克隆化，得到制備DNA標準品或RNA標準品的細胞。
6.根據權利要求5所述的制備DNA標準品或RNA標準品的細胞的制備方法，其特征在于，步驟(1)中所述針對EGFR-E1基因的1號內含子的sgRNA的序列如SEQ ID NO.15所示。
7.根據權利要求6所述的制備DNA標準品或RNA標準品的細胞的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述針對EGFR-E7基因的7號內含子的sgRNA的序列如SEQ ID NO.26所示。
8.根據權利要求7所述的制備DNA標準品或RNA標準品的細胞的制備方法，其特征在于，步驟(4)中所述單克隆化采用有限稀釋法進行。
9.權利要求1所述的EGFRvIII重排的DNA標準品或權利要求2所述的EGFRvIII重排的RNA標準品在制備檢測EGFRvIII重排的試劑盒中的應用。
10.權利要求1所述的EGFRvIII重排的DNA標準品或權利要求2所述的EGFRvIII重排的RNA標準品在LDT或IVD研發體系的性能評價中的應用。
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