[發明專利]一種紫陀螺菌液體菌種的培養基及培養方法

在審

• 申請號: 202210026281.2
• 申請日: 2022-01-11
• 公開（公告）號: CN114946529A
• 公開（公告）日: 2022-08-30
• 發明（設計）人: 譚愛華;劉發志;李方橋
• 申請（專利權）人: 湖北三峽職業技術學院
• 主分類號: A01G18/20
• 分類號: A01G18/20;A01G18/40
• 代理公司: 宜昌市三峽專利事務所 42103
• 代理人: 成鋼

一種紫陀螺菌液體菌種的培養基包括去皮馬鈴薯、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、水組成，pH值5.5～7.0；一種紫陀螺菌液體菌種的培養方法包括制作培養基、接種、液體靜置培養、一級發酵、二級發酵。本發明的優點是，能快速實現紫陀螺菌液體菌種培養的培養基及培養方法，為紫陀螺菌的菌種規模化生產和馴化栽培及其工業化生產（即液體深層培養）奠定了良好的基礎，應用前景十分廣闊。

技術領域

本發明涉及一種紫陀螺菌液體菌種的培養基及培養方法。

背景技術

紫陀螺菌（Gomphus purpuraceus）是一種夏秋季生長在闊葉混交林地的外生菌根菌，人工培育的難度遠遠超過常規腐生菌類。然而，紫陀螺菌的開發利用，無論是通過人工馴化栽培獲得其子實體還是通過液體發酵培養獲得其菌絲體，都離不開優質的紫陀螺菌菌種及菌種的繁育技術。本發明通過各種試驗研究了紫陀螺菌菌種的擴大繁殖技術，摸清了菌絲體生長發育所需的各種營養和環境條件，探究了人工繁育液體菌種的工藝流程及關鍵控制技術，突破了當前人工培育菌絲體生長緩慢的瓶頸，為后期紫陀螺菌子實體的馴化栽培和菌絲體的工業化生產（液體發酵）奠定了良好的基礎。

發明內容

本發明提供一種能快速實現紫陀螺菌液體菌種培養的培養基及培養方法，為紫陀螺菌的菌種規模化生產和馴化栽培及其工業化生產（即液體深層培養）奠定了良好的基礎，應用前景十分廣闊。

實現本發明的技術方案是，一種紫陀螺菌液體菌種的培養基包括去皮馬鈴薯、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、水組成，pH值5.5～7.0。

進一步講，所述培養基由去皮馬鈴薯、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、水組成，去皮馬鈴薯、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、水的重量份量比為25～30:2～3:9～12:0.05～0.12：0～0.12:0～0.06:100～120；

進一步講，所述的培養基還包括干松針；

所述培養基由去皮馬鈴薯、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、干松針、水組成，去皮馬鈴薯、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、干松針、水的重量份量比為25～30:2～3:9～12:0.05～0.12:0～0.12:0～0.06: 5～7:100～120；

一種紫陀螺菌液體菌種的培養方法包括制作培養基、接種、液體靜置培養、一級發酵、二級發酵；

1)所述制作培養基，用去皮馬鈴薯、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、水的重量份量比為25～30:2～3:9～12:0.05～0.12：0～0.12:0～0.06:100～120制作培養基，pH值5.5～7.0；

2）所述接種，按第一培養瓶體積的10%～15%裝入培養基并經高溫高壓滅菌后、冷卻，在無菌條件下，將活化后的紫陀螺菌斜面菌種切分成2～4mm²大小，按每100ml液體培養基添加3～5塊菌種的量接入第一培養瓶中；

3）所述液體靜置培養，接種后的第一培養瓶在20～25℃條件下靜置避光培養50～60天，至菌絲體布滿培養基表面70%以上；

4）所述一級發酵，按第二培養瓶體積（最好為500ml）的40%～50%裝入培養基并經高溫高壓滅菌后、冷卻，在無菌條件下，將所述液體靜置培養中的純菌絲體切碎為每塊0.5～1mm²大小后，全部接入第二培養瓶的培養基中，再將接種后的第二培養瓶放入搖床，轉速設置為150～180rpm，在20～25℃條件下恒溫振蕩培養15～20d，至菌液濃稠為止；

5）所述二級發酵，按第三培養瓶體積的40%～50%裝入培養基并經高溫高壓滅菌后、冷卻，將所述一級發酵中培養的濃稠菌液用大功率攪拌器高速攪拌24～48小時呈均勻的菌漿后，按第三培養瓶培養基體積的10%～15%的比例接入菌漿，接種后將第三培養瓶放入搖床，轉速設置為150～180rpm，在20～25℃條件下恒溫振蕩培養10～15天，至菌液濃稠為止；

通過以上步驟完成紫陀螺菌液體菌種培養。