[發(fā)明專利]一種紫陀螺菌液體菌種的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210026281.2
• 申請(qǐng)日: 2022-01-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114946529A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-08-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 譚愛(ài)華;劉發(fā)志;李方橋
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖北三峽職業(yè)技術(shù)學(xué)院
• 主分類號(hào): A01G18/20
• 分類號(hào): A01G18/20;A01G18/40
• 代理公司: 宜昌市三峽專利事務(wù)所 42103
• 代理人: 成鋼

1.一種紫陀螺菌液體菌種的培養(yǎng)基，其特征是：所述的培養(yǎng)基包括去皮馬鈴薯、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、水組成，pH值5.5～7.0。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紫陀螺菌液體菌種的培養(yǎng)基，其特征是：所述培養(yǎng)基由去皮馬鈴薯、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、水組成，去皮馬鈴薯、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、水的重量份量比為25～30:2～3:9～12:0.05～0.12:0～0.12:0～0.06:100～120。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紫陀螺菌液體菌種的培養(yǎng)基，其特征是：所述的培養(yǎng)基還包括干松針；

所述培養(yǎng)基由去皮馬鈴薯、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、干松針、水組成，去皮馬鈴薯、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、干松針、水的重量份量比為25～30:2～3:9～12:0.05～0.12:0～0.12:0～0.06: 5～7:100～120，pH值5.5～7.0；

用磷酸二氫鉀或磷酸氫二鉀調(diào)節(jié)pH值。

4.一種紫陀螺菌液體菌種的培養(yǎng)方法，其特征是：所述的方法包括制作培養(yǎng)基、接種、液體靜置培養(yǎng)、一級(jí)發(fā)酵、二級(jí)發(fā)酵；

1) 所述制作培養(yǎng)基，用去皮馬鈴薯、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、水的重量份量比為25～30:2～3:9～12:0.05～0.12：0～0.12:0～0.06:100～120制作培養(yǎng)基，pH值5.5～7.0；

2）所述接種，按第一培養(yǎng)瓶體積的10%～15%裝入培養(yǎng)基并經(jīng)高溫高壓滅菌后、冷卻，在無(wú)菌條件下，將活化后的紫陀螺菌斜面菌種切分成2～4mm²大小，按每100ml液體培養(yǎng)基添加3～5塊菌種的量接入第一培養(yǎng)瓶中；

3）所述液體靜置培養(yǎng)，接種后的第一培養(yǎng)瓶在20～25℃條件下靜置避光培養(yǎng)50～60天，至菌絲體布滿培養(yǎng)基表面70%以上；

4）所述一級(jí)發(fā)酵，按第二培養(yǎng)瓶體積的40%～50%裝入培養(yǎng)基并經(jīng)高溫高壓滅菌后、冷卻，在無(wú)菌條件下，將所述液體靜置培養(yǎng)中的純菌絲體切碎為每塊0.5～1mm²大小后，全部接入第二培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)基中，再將接種后的第二培養(yǎng)瓶放入搖床，轉(zhuǎn)速設(shè)置為150～180rpm，在20～25℃條件下恒溫振蕩培養(yǎng)15～20d，至菌液濃稠為止；

5）所述二級(jí)發(fā)酵，按第三培養(yǎng)瓶體積的40%～50%裝入培養(yǎng)基并經(jīng)高溫高壓滅菌后、冷卻，將所述一級(jí)發(fā)酵中培養(yǎng)的濃稠菌液用大功率攪拌器高速攪拌24～48小時(shí)呈均勻的菌漿后，按第三培養(yǎng)瓶培養(yǎng)基體積的10%～15%的比例接入菌漿，接種后將第三培養(yǎng)瓶放入搖床，轉(zhuǎn)速設(shè)置為150～180rpm，在20～25℃條件下恒溫振蕩培養(yǎng)10～15天，至菌液濃稠為止；

通過(guò)以上步驟完成紫陀螺菌液體菌種培養(yǎng)。

5.一種紫陀螺菌液體菌種的培養(yǎng)方法，其特征是：所述的方法包括制作培養(yǎng)基、接種、液體靜置培養(yǎng)、一級(jí)發(fā)酵、二級(jí)發(fā)酵；

1)所述制作第一培養(yǎng)基，用去皮馬鈴薯、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、水的重量份量比為25～30:2～3:9～12:0.05～0.12:0～0.12:0～0.06:100～120制作培養(yǎng)基，pH值5.5～7.0；

所述制作第二培養(yǎng)基，用去皮馬鈴薯、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、干松針、水的重量份量比為25～30:2～3:9～12:0.05～0.12:0～0.12:0～0.06: 5～7:100～120制作培養(yǎng)基，pH值5.5～7.0；

所述接種，按第一培養(yǎng)瓶體積的10%～15%裝入第一培養(yǎng)基并經(jīng)高溫高壓滅菌后、冷卻，在無(wú)菌條件下，將活化后的紫陀螺菌斜面菌種切分成2～4mm²大小，按每100ml液體培養(yǎng)基添加3～5塊菌種的量接入第一培養(yǎng)瓶中；

所述液體靜置培養(yǎng)，接種后的第一培養(yǎng)瓶在20～25℃條件下靜置避光培養(yǎng)50～60天，至菌絲體布滿培養(yǎng)基表面70%以上；

4）所述一級(jí)發(fā)酵，按第二培養(yǎng)瓶體積的40%～50%裝入第二培養(yǎng)基，經(jīng)高溫高壓滅菌后、冷卻，在無(wú)菌條件下，將所述液體靜置培養(yǎng)中的純菌絲體切碎為每塊0.5～1mm²大小后，全部接入第二培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)基中，再將接種后的第二培養(yǎng)瓶放入搖床，轉(zhuǎn)速設(shè)置為150～180rpm，在20～25℃條件下恒溫振蕩培養(yǎng)12～13d，至菌液濃稠為止；

5）所述二級(jí)發(fā)酵，按第三培養(yǎng)瓶體積的40%～50%裝入第二培養(yǎng)基，同時(shí)配備切分?jǐn)嚢柙O(shè)備，并經(jīng)高溫高壓滅菌后、冷卻，將所述一級(jí)發(fā)酵中培養(yǎng)的濃稠菌液用大功率攪拌器高速攪拌24～48小時(shí)呈均勻的菌漿后，按第三培養(yǎng)瓶培養(yǎng)基體積的10%～15%的比例接入菌漿，接種后將第三培養(yǎng)瓶放入搖床，轉(zhuǎn)速設(shè)置為150～180rpm，在20～25℃條件下恒溫振蕩培養(yǎng)8～9天，振蕩培養(yǎng)期間可通過(guò)切分?jǐn)嚢柙O(shè)備將第三培養(yǎng)瓶中的菌球打碎，直至瓶中菌液濃稠為止；

通過(guò)以上步驟完成紫陀螺菌液體菌種培養(yǎng)。