[發明專利]與疆南絨山羊羊絨纖維直徑及其變異系數相關的分子標記及特異性引物對和應用

在審

• 申請號: 202210024306.5
• 申請日: 2022-01-07
• 公開（公告）號: CN114350816A
• 公開（公告）日: 2022-04-15
• 發明（設計）人: 付雪峰;吳翠玲;秦崇凱;石剛;薛多雄;何軍敏;劉靜;毛靜藝
• 申請（專利權）人: 新疆畜牧科學院畜牧研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11;C12Q1/6858;C12Q1/6806
• 代理公司: 烏魯木齊合縱專利商標事務所 65105
• 代理人: 周星瑩;譚南

1.一種與疆南絨山羊羊絨纖維直徑及纖維直徑變異系數性狀相關的分子標記，其特征在于其位于疆南絨山羊1號染色體的KRTAP27-1基因上，KRTAP27-1基因位于1號染色體核苷酸序列的第3968645bp-3969193bp處，所述分子標記位于1號染色體核苷酸序列的3968799bp處，突變堿基為A或G。

2.一種用于擴增權利要求1所述的與疆南絨山羊羊絨纖維直徑及纖維直徑變異系數性狀相關的分子標記的特異性引物對，其特征在于包括上游引物和下游引物；

上游引物：5’-agtggcgtatcctacagaactcact-3’；

下游引物：5’-cgctactcaggctcctcctg-3’。

3.一種權利要求2所述的特異性引物對在制備體外檢測與疆南絨山羊羊絨纖維直徑及纖維直徑變異系數性狀相關的分子標記的試劑或試劑盒的應用。

4.一種權利要求1所述的分子標記在疆南絨山羊羊絨纖維直徑及纖維直徑變異系數性狀選擇中的應用。

5.根據權利要求4所述的分子標記在疆南絨山羊羊絨纖維直徑及纖維直徑變異系數性狀選擇中的應用，其特征在于包括下述步驟：第一步，取待測疆南絨山羊的基因組DNA；第二步，以基因組DNA為模板，利用特異性引物對進行第一輪擴增，第一輪PCR體系為25μl的反應體系，第一輪PCR體系由下列成分組成：

第一輪PCR擴增條件為：98度預變性3分鐘，然后執行8個循環，循環條件是94度變性30秒，50度退火30秒，72度延伸30秒；緊接著執行25個循環，循環條件是98度變性30秒，66度退火30秒，72度延伸30秒；最后72度延伸5分鐘，PCR反應完成后，4度保溫；

上游引物池：5’-agtggcgtat cctacagaac tcact-3’；

下游引物池：5’-cgctactcag gctcctcctg-3’；

第三步，以第一輪PCR產物為模板執行第二輪PCR反應，第二輪PCR體系為30μl的反應體系，第二輪PCR體系由下列成分組成：

第二輪PCR擴增條件為：98度預變性5分鐘，然后執行5個循環，循環條件是變性94度30秒，55度退火20秒，72度延伸30秒，最終72度延伸5分鐘，PCR反應完成后，4度保溫，各個PCR產物等量混合后，進行測序，根據測序結果進行基因分型；

對于羊絨纖維直徑性狀，所述分子標記對應的基因型中，含有G基因的GG或GA基因型的疆南絨山羊屬于羊絨纖維直徑性狀較細的優勢個體；對于羊絨纖維直徑變異系數性狀，所述分子標記對應的基因型中，AA基因型疆南絨山羊屬于羊絨纖維直徑變異系數性狀較小的優勢個體。