[發明專利]用于檢測HLA-B*15：02等位基因的引物組及其應用

在審

• 申請號: 202210022817.3
• 申請日: 2022-01-10
• 公開（公告）號: CN114350786A
• 公開（公告）日: 2022-04-15
• 發明（設計）人: 關國良;陳建雄;陳薛名;陳巧玲;吳婧
• 申請（專利權）人: 常州先趨醫療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6844;C12Q1/6825;C12N15/11
• 代理公司: 北京細軟智谷知識產權代理有限責任公司 11471
• 代理人: 劉靜榮

本發明屬于生物技術領域，具體涉及用于檢測HLA?B*15：02等位基因的引物組及其應用。本發明的用于檢測HLA?B*15：02等位基因的引物組，包括引物組A和引物組B，引物A的引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.6所示，引物組B的引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.8～SEQ ID NO.13所示。本發明針對HLA?B*15:02基因的兩個外顯子設計了LAMP反應引物，LAMP反應中有4條特異性引物，對靶基因上6個區域進行識別，保證了LAMP反應的高度擴增性和特異性，特異性達100％。同時，設計兩條環引物，將LAMP擴增時間大幅度降低，控制在20分鐘左右。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及用于檢測HLA-B*15：02等位基因的引物組及其應用。

背景技術

癲癇是大腦神經元突發性異常放電，導致短暫的大腦功能障礙的一種慢性疾病，是一種主要的全球性疾病，尤其在資源匱乏和收入低的亞洲國家，癲癇患病率較高。

近年來在治療癲癇和外周神經痛等方面廣泛應用卡馬西平，其具有價格低、療效好的特點。但是研究發現，部分抗癲癇藥物會引起超敏反應，例如，服用馬卡西平引起的不良反應包括嚴重的皮膚病-Steven-Johnson綜合征(SJS)和中毒性表皮壞死松解癥(TEN)。SJS/TEN的發病率從藥物暴露的千分之一到萬分之一不等，死亡率高達35％。藥物遺傳學研究已經發現了抗癲癇藥物誘導的不良反應與HLA-B*15:02等位基因之間存在很強的關聯性，且HLA-B*15:02等位基因主要見于亞洲人群。作為預防措施，美國食品和藥物管理局(FDA)強制要求對高危人群用藥前進行等位基因的篩查。

HLA-B*15:02等位基因的常規檢測方法主要為PCR擴增熒光檢測法，其具有準確度高的特點，但需要昂貴的實驗室設備、熟練的實驗室人員，且必須在實驗室中完成。此外，PCR擴增前，提取DNA是必需的步驟。在臨床檢測中，HLA檢測從樣本收集、運輸到檢測和向臨床醫生報告結果，有很長的周轉時間(幾天至一周)，影響了有效的治療策略，尤其對癲癇發作期間或癲癇發作后的快速給藥構成了障礙，以上原因極大限制了卡馬西平在普通醫療機構的大面積推廣。

雖然目前LAMP等溫擴增技術在生物安全行業也使用廣泛，尤其用于快速篩查方面，但因為假陽性高，在靈敏度和特異性方面無法做到和PCR一樣高的精度，所以目前在醫學檢測行業沒有廣泛使用。

為了克服這些障礙，需要一種快速、準確、便攜式、操作簡便的針對HLA-B*15:02基因的體外快速檢測方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于檢測HLA-B*15：02等位基因的引物組。

本發明的再一目的在于提供上述引物組的應用。

本發明的再一目的在于提供含有上述引物探針組的試劑盒。

本發明的再一目的在于提供檢測個體中HLA-B*15：02分型的方法。

根據本發明具體實施方式的檢測個體中HLA-B*15：02等位基因的引物組，包括引物組A和引物組B，

針對HLA-B*15:02基因的兩個外顯子，外顯子2和外顯子3，分別設計了LAMP反應引物探針組A和引物探針組B，LAMP反應中有4條特異性引物(包括正向和后外引物(F3和B3)，正向和后內引物(FIP和BIP)，以及環狀引物(FL和BL))，對靶基因上6個區域進行識別，保證了LAMP反應的高度擴增性和特異性，

其中，引物組A的引物的核苷酸序列如下：

SEQ ID NO.1:5’-TGAGGTTCGACAGCGACG-3’,

SEQ ID NO.2:5’-TCACCGGCCTCGCTCT-3’,