[發(fā)明專利]一種高產(chǎn)率膠原海綿的制備工藝

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210018910.7
• 申請日: 2022-01-10
• 公開（公告）號: CN114032623B
• 公開（公告）日: 2022-03-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張孌;張偉;張伊驍;孫冰冰
• 申請（專利權(quán)）人: 天新福（北京）醫(yī)療器材股份有限公司
• 主分類號: D01F4/00
• 分類號: D01F4/00;D01F1/10;C08J9/28;C08L89/00;C08L5/08;C07K14/78;C07K1/14;C12P21/06
• 代理公司: 北京細(xì)軟智谷知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11471
• 代理人: 劉靜榮

1.一種高產(chǎn)率膠原海綿的制備工藝，其特征在于，所述制備工藝包括以下步驟：

（1）切割：選取富含膠原的動物組織，切成片或塊，形成組織片或組織塊；所述富含膠原的動物組織為牛或豬的皮膚或跟腱；

（2）前處理：將步驟（1）得到的所述組織片或組織塊浸泡在氯化鈉溶液中，氯化鈉溶液的濃度為0.5-1.5wt%，磁力攪拌進(jìn)行第一次混合，然后水洗去除氯化鈉溶液；然后向浸泡后組織中加入乙醇溶液，所述乙醇溶液的濃度為60-90wt%，磁力攪拌進(jìn)行第二次混合，然后水洗去除乙醇溶液，形成前處理組織；

（3）酶反應(yīng)：在酸性或弱堿性溶液中，加入10-20wt%步驟（2）得到的所述前處理組織，再加入蛋白酶進(jìn)行酶解，酶解完成后中止反應(yīng)；然后水洗去除溶液，形成待粉碎組織；

（4）粉碎：將步驟（3）得到的所述待粉碎組織進(jìn)行粉碎后過篩，形成粉碎后動物組織；

（5）堿處理：在含有氫氧化鈉和硫酸鈉的溶液中，加入10-20wt%步驟（4）得到的所述粉碎后動物組織進(jìn)行反應(yīng)；反應(yīng)完成后用酸中和至pH為4.0-5.0，再用清水進(jìn)行清洗，形成保持三股螺旋結(jié)構(gòu)的膠原；

（6）凍干成膜：在0.05M的醋酸溶液中，加入步驟（5）得到的所述保持三股螺旋結(jié)構(gòu)的膠原和硫酸軟骨素鈉進(jìn)行均質(zhì)，所述保持三股螺旋結(jié)構(gòu)的膠原的添加量為所述醋酸溶液0.4-0.6wt%，所述硫酸軟骨素鈉的添加量為所述醋酸溶液0.04-0.06wt%；將均質(zhì)后所得的溶液進(jìn)行冷凍干燥，制成膠原海綿。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)率膠原海綿的制備工藝，其特征在于，步驟（3）中，所述蛋白酶為無花果蛋白酶，在pH為5.5-6.8的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液中，加入10-20wt%所述前處理組織，再加入所述前處理組織0.1-2wt%的無花果蛋白酶，在25-37℃磁力攪拌反應(yīng)0.5-5h，反應(yīng)完成后加入亞氯酸鈉、硝酸銨、雙氧水中的一種或幾種組合，在25℃-37℃下反應(yīng)0.5-2h，中止酶反應(yīng)，水洗去除溶液，形成待粉碎組織。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)率膠原海綿的制備工藝，其特征在于，步驟（3）中，所述蛋白酶為胃蛋白酶，在pH為2.5-4.5的酸性溶液中，加入10-20wt%前處理組織，再加入所述前處理組織1.0-15wt%的胃蛋白酶，在25-37℃下，反應(yīng)2-12h，反應(yīng)完成后加入0.5-10M氫氧化鈉中和溶液至pH為5.0，中止酶反應(yīng)，水洗去除溶液，形成待粉碎組織。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)率膠原海綿的制備工藝，其特征在于，步驟（3）中，所述蛋白酶為胰蛋白酶，在pH為7.5-7.8的弱堿性溶液中，加入10-20wt%前處理組織，再加入所述前處理組織1.0-15wt%的胰蛋白酶，在25-37℃下，反應(yīng)2-12h，反應(yīng)完成后加入0.5-10M鹽酸溶液中和溶液至pH為5.0，中止酶反應(yīng)，水洗去除溶液，形成待粉碎組織。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)率膠原海綿的制備工藝，其特征在于，步驟（2）中，所述組織片或組織塊浸泡在0.5-1.5%的氯化鈉溶液中，以每克組織中加入5-10ml的氯化鈉溶液的比例進(jìn)行第一次混合，在25-37℃下磁力攪拌12-36h，然后水洗去除氯化鈉溶液，以每克浸泡后組織中加入5-10ml濃度為60-90wt%的乙醇溶液的比例進(jìn)行第二次混合，在25-37℃下磁力攪拌12-36h，水洗去除乙醇溶液，形成前處理組織。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的高產(chǎn)率膠原海綿的制備工藝，其特征在于，步驟（3）中，若酶解組織中只加入亞氯酸鈉，則所述亞氯酸鈉的添加量為所述前處理組織的0.05-0.5wt%；若酶解組織中只加入硝酸銨，則所述硝酸銨的添加量為所述前處理組織的1-10wt%；若酶解組織中只加入雙氧水，則所述雙氧水的添加量為所述前處理組織的1-10wt%。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)率膠原海綿的制備工藝，其特征在于，步驟（4）中，所述粉碎后動物組織的粒徑為0-300μm。