[發(fā)明專利]一種裂解結(jié)合液、RNA提取試劑盒及RNA提取方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210017237.5
• 申請日: 2022-01-07
• 公開（公告）號: CN114317526A
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 龐經(jīng)昊;黃明賢;任輝
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州海貍生物醫(yī)學(xué)工程有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/6806
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 常亮

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種裂解結(jié)合液、RNA提取試劑盒及RNA提取方法。利用該裂解結(jié)合液可在室溫環(huán)境下不加熱提取病毒樣本中的RNA，不容易產(chǎn)生氣溶膠污染；提取過程方便快捷，無需使用蛋白酶K；提取時間縮短至9分鐘，大大節(jié)省了病毒RNA提取時間，同時提取效果大于等于市面上大部分同類試劑盒，提取出的RNA可直接用于后續(xù)RT?qPCR檢測或保存于?70℃冰箱中。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種裂解結(jié)合液、RNA提取試劑盒及RNA提取方法。

背景技術(shù)

近年來，越來越多的科研結(jié)果表明，RNA在生命進(jìn)程中的作用遠(yuǎn)不止于此，在2002年度Science評選的10大科學(xué)成就中RNAi名列榜首。在所有RNA實驗中，最關(guān)鍵的步驟是分離得到純度高且完整的RNA。RNA病毒作為感染性疾病重要的病原之一，其檢測對于臨床治療有重要的意義。在臨床上病毒核酸檢測可作為病毒感染重要的參考依據(jù)，而病毒的核酸提取是首要工作。

實驗室提取RNA的方法有異硫氰酸胍-苯酚法(Trizol)、酚-SDS法、鹽酸胍法等，目前通常采用傳統(tǒng)的Trizol法，最大的特點是Trizol試劑含有多組分分離作用，可同時分離一個樣品的RNA、DNA、蛋白質(zhì)，但是存在分離效率不高，RNA純度不穩(wěn)定等缺點。

現(xiàn)在市面上的病毒RNA提取試劑盒包括硅基質(zhì)膜柱提法試劑盒與磁珠法試劑盒兩種，其中硅基質(zhì)膜柱提法試劑盒須使用離心機(jī)多次離心，操作相對繁瑣并且較難實現(xiàn)自動化操作，提取速度慢；對于檢測機(jī)構(gòu)檢測大量樣本而言提取時間比較久。磁珠法試劑盒配合自動化核酸提取儀提取時間大部分都在20分鐘到40分鐘之間，且提取過程中需要加熱到60℃以上，過高的溫度加上手工提取過程中高速渦旋或自動化提取中的磁棒套高速震蕩，提取過程會產(chǎn)生氣溶膠，氣溶膠內(nèi)可能攜帶病毒核酸導(dǎo)致(1)造成提取過程中各個樣本之間交叉污染風(fēng)險，影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性(2)氣溶膠外泄造成實驗人員感染病毒的風(fēng)險。而且，這兩種試劑盒中使用蛋白酶K，蛋白酶K需要低溫冷藏或冷凍，保存不方便并且有保存或運輸不當(dāng)?shù)鞍酌窴變性失活的風(fēng)險。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種裂解結(jié)合液、RNA提取試劑盒及RNA提取方法，該裂解結(jié)合液可以在室溫狀態(tài)下配合自動化核酸提取儀在9分鐘內(nèi)快速提取病毒RNA并且無需蛋白酶K的病毒RNA提取試劑盒，方便快捷高效，減少氣溶膠污染風(fēng)險。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

一種裂解結(jié)合液，包括DEPC水和如下濃度的組分：

作為優(yōu)選，所述裂解結(jié)合液包括DEPC水和如下濃度的組分：

一些具體實施例中，所述裂解結(jié)合液包括DEPC水和如下濃度的組分：

一些實施方案中，所述裂解結(jié)合液還包括0.1-1wt％十二烷基磺酸鈉和/或0.1-10wt％月桂基硫酸鈉。

一些具體實施例中，所述裂解結(jié)合液包括DEPC水和如下濃度的組分：

本發(fā)明還提供了以上所述的裂解結(jié)合液在提取血液RNA中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了RNA提取試劑盒，包括本發(fā)明所述的裂解結(jié)合液。

一些實施方案中，所述RNA提取試劑盒還包括清洗液、洗脫液和磁珠中的至少一種。

一些實施方案中，所述清洗液包括第一清洗液和第二清洗液；

所述第一清洗液包括以下組分：

0.1-10M鹽酸胍；

0.1-10M氯化鈉；