[發明專利]影響鄂爾多斯細毛羊羊毛纖維直徑變異系數性狀的分子標記、獲得方法及其特異性引物對和應用

有效

• 申請號: 202210015141.5
• 申請日: 2022-01-07
• 公開（公告）號: CN114231643B
• 公開（公告）日: 2023-07-07
• 發明（設計）人: 吳翠玲;付雪峰;斯登丹巴;谷英;石剛;薛多雄;德德瑪
• 申請（專利權）人: 新疆畜牧科學院畜牧研究所;鄂爾多斯市農牧業科學研究院（內蒙古農牧科學院鄂爾多斯分院）
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 烏魯木齊合縱專利商標事務所 65105
• 代理人: 湯潔;譚南

本發明涉及動物分子標記技術領域，是一種影響鄂爾多斯細毛羊羊毛纖維直徑變異系數性狀的分子標記、獲得方法以及其特異性引物對和應用，該分子標記包括分子標記Indel1和分子標記SNP1，分子標記Indel1為LMNB1基因P1片段的第2內含子上缺失的四個堿基TATT，分子標記SNP1為LMNB1基因P1片段的第3外顯子上的變化堿基C或T。本發明通過首次對鄂爾多斯細毛羊LMNB1基因與羊毛性狀相關性研究，對影響鄂爾多斯細毛羊羊毛纖維直徑變異系數性狀相關的分子標記定位，獲得基因突變位點，發現含有ATCT和TTTT的基因型在超細型群體選育中具有優勢，為鄂爾多斯細毛羊高產、超細型群體的選育提供方法和指導。

技術領域

本發明涉及動物分子標記技術領域，是一種影響鄂爾多斯細毛羊羊毛纖維直徑變異系數性狀的分子標記、獲得方法以及其特異性引物對和應用。

背景技術

鄂爾多斯細毛羊是1985年育成命名的毛肉兼用細毛羊培育品種，主產區為鄂爾多斯市毛烏素沙區，烏審旗為核心產區。2008年，鄂爾多斯細毛羊成功取得農業部“農產品地理標志登記證書”。鄂爾多斯細毛羊及其產品在國內外市場具備較大競爭潛力。但隨著人們日益增長的物質文化需求和紡織工藝技術的提高，國內外毛紡產品開始向輕薄、柔軟、挺括、高檔方向發展。因此鄂爾多斯細毛羊高產、超細型群體的選育是目前主要任務。

隨著現代生物技術的發展，從分子水平上對家畜主要經濟性狀進行研究，提高了選種的準確性和效率。核纖層蛋白(LaminB1，LMNB1)基因定位綿羊5號染色體上，有11個外顯子。LaminB1在器官發育和組織分化過程中具有重要調節作用，是核纖層重要的組成部分。T課題組前期通過qRT-PCR法發現LMNB1基因相對于細毛組，在超細毛組的綿羊皮膚中表達上調。提示LMNB1基因在羊毛性狀中參與調控作用。目前在LMNB1基因在綿羊羊毛性狀研究較少，因此，需要對對鄂爾多斯細毛羊LMNB1基因多態性分析，實現加快鄂爾多斯細毛羊超細型群體選育進程。

發明內容

本發明提供了一種影響鄂爾多斯細毛羊羊毛纖維直徑變異系數性狀的分子標記、獲得方法以及其特異性引物對和應用，通過對影響鄂爾多斯細毛羊羊毛纖維直徑變異系數性狀的分子標記定位，獲得基因突變位點，實現基因分型，發現含有ATCT基因型和TTTT基因型在超細型群體選育中具有優勢，為鄂爾多斯細毛羊高產、超細型群體的選育提供方法和指導。

本發明的技術方案之一是通過以下措施來實現的：一種影響鄂爾多斯細毛羊羊毛纖維直徑變異系數性狀的分子標記，包括分子標記Indel1和分子標記SNP1，分子標記Indel1位于綿羊5號染色體24654403bp-24654406bp處的LMNB1基因P1片段的第2內含子上，分子標記SNP1位于綿羊5號染色體24654282bp處的LMNB1基因P1片段的第3外顯子上，分子標記Indel1為綿羊5號染色體24654403bp-24654406bp處的LMNB1基因P1片段的第2內含子上缺失的四個堿基TATT，分子標記SNP1為綿羊5號染色體24654282bp處的LMNB1基因P1片段的第3外顯子上的G或A,等位基因突變C或T。

下面是對上述發明技術方案之一的進一步優化或/和改進：

上述于按照下述方法獲得：第一步，取待測的鄂爾多斯細毛羊母羊的血液基因組DNA；第二步，以血液基因組DNA為模板進行PCR擴增，PCR反應體系：PCRMixture10μL，濃度為10mol/L的上下游引物各0.5μL，上游引物序列為5’-GCAGTTGAACCCACACTTCTG-3’，下游引物序列為5’-TTGCCTACAGAATCCTTCCC-3’，DNA模板1.0μL，加蒸餾水至20μL，將建立好的PCR體系放入PCR儀中反應，反應條件：95℃預變性3min，95℃變性30s，60℃退火30s，72℃延伸1min，34個循環，72℃延伸5min，4℃保存，得到PCR產物；第三步，對PCR產物進行雙向測序，根據雙向測序篩選到突變位點，設計特異性引物對，利用Snapshot檢測技術進行突變基因分型，得到對于鄂爾多斯細毛羊羊毛纖維直徑變異系數性狀顯著相關的分子標記Indel1和分子標記SNP1。