[發明專利]影響鄂爾多斯細毛羊羊毛纖維直徑變異系數性狀的分子標記、獲得方法及其特異性引物對和應用

有效

• 申請號: 202210015141.5
• 申請日: 2022-01-07
• 公開（公告）號: CN114231643B
• 公開（公告）日: 2023-07-07
• 發明（設計）人: 吳翠玲;付雪峰;斯登丹巴;谷英;石剛;薛多雄;德德瑪
• 申請（專利權）人: 新疆畜牧科學院畜牧研究所;鄂爾多斯市農牧業科學研究院（內蒙古農牧科學院鄂爾多斯分院）
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 烏魯木齊合縱專利商標事務所 65105
• 代理人: 湯潔;譚南

1.一種影響鄂爾多斯細毛羊羊毛纖維直徑變異系數性狀的分子標記在鄂爾多斯細毛羊高產、超細型群體的選育中的應用，其特征在于包括分子標記Indel1和分子標記SNP1，分子標記Indel1位于綿羊5號染色體24654403bp-24654406bp處的LMNB1基因P1片段的第2內含子上，分子標記SNP1位于綿羊5號染色體24654282bp處的LMNB1基因P1片段的第3外顯子上，分子標記Indel1為綿羊5號染色體24654403bp-24654406bp處的LMNB1基因P1片段的第2內含子上缺失的四個堿基AATA，分子標記SNP1為綿羊5號染色體24654282bp處的LMNB1基因P1片段的第3外顯子上的變化堿基G或A,等位基因突變C或T。

2.根據權利要求1所述的影響鄂爾多斯細毛羊羊毛纖維直徑變異系數性狀的分子標記在鄂爾多斯細毛羊高產、超細型群體的選育中的應用，其特征在于按照下述方法獲得：第一步，取待測的鄂爾多斯細毛羊母羊的血液基因組DNA；第二步，以血液基因組DNA為模板進行PCR擴增，PCR反應體系：PCRMixture10μL，濃度為10mol/L的上下游引物各0.5μL，上游引物序列為5’-GCAGTTGAACCCACACTTCTG-3’，下游引物序列為5’-TTGCCTACAGAATCCTTCCC-3’，DNA模板1.0μL，加蒸餾水至20μL，將建立好的PCR體系放入PCR儀中反應，反應條件：95℃預變性3min，95℃變性30s，60℃退火30s，72℃延伸1min，34個循環，72℃延伸5min，4℃保存，得到PCR產物；第三步，對PCR產物進行雙向測序，根據雙向測序篩選到突變位點，設計引物對，利用Snapshot檢測技術進行突變基因分型，得到對于鄂爾多斯細毛羊羊毛纖維直徑變異系數性狀顯著相關的分子標記Indel1和分子標記SNP1。

3.一種根據權利要求1所述的影響鄂爾多斯細毛羊羊毛纖維直徑變異系數性狀的分子標記的獲得方法，其特征在于按照下述方法進行：第一步，取待測的鄂爾多斯細毛羊母羊的血液基因組DNA；第二步，以血液基因組DNA為模板進行PCR擴增，PCR反應體系：PCRMixture10μL，濃度為10mol/L的上下游引物各0.5μL，上游引物序列為5’-GCAGTTGAACCCACACTTCTG-3’，下游引物序列為5’-TTGCCTACAGAATCCTTCCC-3’，DNA模板1.0μL，加蒸餾水至20μL，將建立好的PCR體系放入PCR儀中反應，反應條件：95℃預變性3min，95℃變性30s，60℃退火30s，72℃延伸1min，34個循環，72℃延伸5min，4℃保存，得到PCR產物；第三步，對PCR產物進行雙向測序，根據雙向測序篩選到突變位點，設計引物對，利用Snapshot檢測技術進行突變基因分型，得到對于鄂爾多斯細毛羊羊毛纖維直徑變異系數性狀顯著相關的分子標記Indel1和分子標記SNP1。

4.根據權利要求3所述的影響鄂爾多斯細毛羊羊毛纖維直徑變異系數性狀的分子標記的獲得方法，其特征在于引物對包括分子標記Indel1的引物對和分子標記SNP1的引物對，分子標記Indel1的引物對和分子標記SNP1的引物對均包括上游引物、下游引物和延伸引物，其中，分子標記Indel1的引物對：上游引物為5’-GACTCTCATACATTGACAAATACA-3’、下游引物為5’-ACTCCAAGTCCTCAGTAAG-3’、延伸引物為5’-CTGACTGACTGACTGACTGACTTGATTCAATCCATCGGTATC-3’，分子標記SNP1的引物對：上游引物為5’-GACTCTCATACATTGACAAATACA-3’、下游引物為5’-ACTCCAAGTCCTCAGTAAG-3’、延伸引物為5’-CTGACTGACTGACTGACTGACTAGATGAAACTTTACTTAAAGTGGA-3’。