[發明專利]與鄂爾多斯細毛羊羊毛纖維直徑性狀相關的分子標記及特異性引物對和應用

在審

• 申請號: 202210015107.8
• 申請日: 2022-01-07
• 公開（公告）號: CN114231642A
• 公開（公告）日: 2022-03-25
• 發明（設計）人: 付雪峰;吳翠玲;谷英;斯登丹巴;石剛;薛多雄;德德瑪
• 申請（專利權）人: 新疆畜牧科學院畜牧研究所;鄂爾多斯市農牧業科學研究院（內蒙古農牧科學院鄂爾多斯分院）
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6809;C12N15/11
• 代理公司: 烏魯木齊合縱專利商標事務所 65105
• 代理人: 湯潔;譚南

本發明涉及動物分子標記技術領域，是一種與鄂爾多斯細毛羊羊毛纖維直徑性狀相關的分子標記及特異性引物對和應用，包括分子標記SNP5，分子標記SNP5位于綿羊1號染色體98337781處的TXNIP基因3’UTR區上，分子標記SNP5為TXNIP基因3’突變堿基G或A。本發明首次發現TXNIP基因3’UTR的SNP5突變位點與羊毛纖維直徑極顯著相關，隨著C等位基因拷貝數的增加，纖維直徑減小，與鄂爾多斯細毛羊羊毛纖維直徑性狀相關的分子標記為鄂爾多斯細毛羊高產、超細型群體的選育提供方法和指導。

技術領域

本發明涉及動物分子標記技術領域，是一種與鄂爾多斯細毛羊羊毛纖維直徑性狀相關的分子標記及特異性引物對和應用。

背景技術

鄂爾多斯細毛羊羊毛綜合品質優良，被毛閉合性良好，密度大，細度以66支至70支為主。群體羊毛性狀遺傳穩定。羊毛纖維直徑、纖維長度、產毛量決定了羊毛纖維的品質，是絨毛羊產業重要的經濟性狀和數量性狀，受微效多基因控制，利用傳統的育種方法很難再提高羊毛品質及生產性能。目前對綿、山羊絨毛性狀相關基因多態性的研究均主要集中在角蛋白家族基因和角蛋白關聯蛋白家族基因中，未見TXNIP基因多態性顯著影響羊毛性狀的報道。

目前對TXNIP的研究，主要集中在人類肥胖、糖尿病、高血壓和神經疾病等，在綿羊上的研究較少。

發明內容

本發明提供了一種與鄂爾多斯細毛羊羊毛纖維直徑性狀相關的分子標記及特異性引物對和應用，克服了上述現有技術之不足，首次對鄂爾多斯細毛羊TXNIP基因中突變位點遺傳多態性分析，通過與鄂爾多斯細毛羊羊毛纖維直徑性狀相關的分子標記，實現了鄂爾多斯細毛羊超細型群體的選育。

本發明的技術方案之一是通過以下措施來實現的：一種與鄂爾多斯細毛羊羊毛纖維直徑性狀相關的分子標記，包括分子標記SNP5，分子標記SNP5位于綿羊1號染色體98337781處的TXNIP基因3’UTR區上，分子標記SNP5為TXNIP基因3’UTR區突變堿基G或A,等位基因突變C或T。

下面是對上述發明技術方案之一的進一步優化或/和改進：

上述按照下述方法獲得：第一步，取待測的鄂爾多斯細毛羊母羊的血液基因組DNA；第二步，以血液基因組DNA為模板進行PCR擴增，PCR反應體系：PCRMixture10μL，濃度為10mol/L的上下游引物各0.5μL，上游引物序列為5’-TTGCCAGACTGGATTGTTGTG-3’，下游引物序列為5’-GAACACAGTGCAACAAGCTCT-3’，DNA模板1.0μL，加蒸餾水至20μL，將建立好的PCR體系放入PCR儀中反應，反應條件：95℃預變性3min，95℃變性30s，60℃退火30s，72℃延伸1min，34個循環，72℃延伸5min，4℃保存，得到PCR產物；第三步，對PCR產物進行雙向測序，根據雙向測序篩選到突變位點，設計特異性引物對，利用Snapshot檢測技術進行突變基因分型，得到對于鄂爾多斯細毛羊羊毛纖維直徑性狀顯著相關的分子標記SNP5。

本發明的技術方案之二是通過以下措施來實現的：一種與鄂爾多斯細毛羊羊毛纖維直徑性狀相關的分子標記的獲得方法，按照下述方法進行：第一步，取待測的鄂爾多斯細毛羊母羊的血液基因組DNA；第二步，以血液基因組DNA為模板進行PCR擴增，PCR反應體系：PCRMixture10μL，濃度為10mol/L的上下游引物各0.5μL，上游引物序列為5’-TTGCCAGACTGGATTGTTGTG-3’，下游引物序列為5’-GAACACAGTGCAACAAGCTCT-3’，DNA模板1.0μL，加蒸餾水至20μL，將建立好的PCR體系放入PCR儀中反應，反應條件：95℃預變性3min，95℃變性30s，60℃退火30s，72℃延伸1min，34個循環，72℃延伸5min，4℃保存，得到PCR產物；第三步，對PCR產物進行雙向測序，根據雙向測序篩選到突變位點，設計特異性引物對，利用Snapshot檢測技術進行突變基因分型，得到對于鄂爾多斯細毛羊羊毛纖維直徑性狀顯著相關的分子標記SNP5。