[發(fā)明專利]一種ENO2單克隆抗體1C5及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210011859.7
• 申請(qǐng)日: 2022-01-07
• 公開（公告）號(hào): CN114478784B
• 公開（公告）日: 2022-11-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 閆亞平;郝文斌;張亞劍;穆瑜;王璐;劉龍?jiān)?/a>;李科
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 陜西脈元生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/40
• 分類號(hào): C07K16/40;C12N15/13;C12N15/85;C12N5/10;C12P21/08;G01N33/577;G01N33/573
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 蘇士瑩

本發(fā)明提供了一種ENO2單克隆抗體1C5及其制備方法和應(yīng)用，涉及單克隆抗體技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明公開了所述單克隆抗體1C5的重鏈和輕鏈的可變區(qū)的互補(bǔ)決定區(qū)序列，基于所述序列，可將可變區(qū)序列構(gòu)建到抗體表達(dá)載體上，轉(zhuǎn)染細(xì)胞表達(dá)獲得重組單克隆抗體。本發(fā)明得到的單克隆抗體1C5載體易于保存，易于抗體生產(chǎn)過程質(zhì)量控制；本發(fā)明所述單克隆抗體1C5，可以識(shí)別ENO2蛋白，具有生物學(xué)活性，可用于ENO2抗原檢測(cè)等其它科學(xué)研究，具有非常好的應(yīng)用價(jià)值和非常重要科研指導(dǎo)意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于單克隆抗體技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種ENO2單克隆抗體1C5及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

烯醇化酶是生物體內(nèi)糖酵解過程中的關(guān)鍵酶，在脊椎動(dòng)物中，烯醇化酶(enolase)存在3種同功酶:α、β和γ。α-enolase(ENO1)又稱為非神經(jīng)元烯醇化酶(non-neuralenolase,NNE)，在許多組織均存在；β-enolase(ENO3)又稱為肌肉特異性烯醇化酶(muscle-specificenolase,MSE)、骨胳肌enolase(skeletalmuscleenolase)，幾乎僅見于肌肉組織；γ-enolase(ENO2)又稱為神經(jīng)元烯醇化酶(neuraleno-lase)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron-specificeno-lase,NSE)，主要存在于神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌組織。Enolase的活性形式均為二聚體，即由兩個(gè)亞基組成，目前已知有5種形式的組合：αα、ββ、γγ、αβ和αγ。

烯醇化酶2(ENO2)又稱NSE，NSE主要存在于神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的胞質(zhì)。神經(jīng)元特異性烯醇化酶是一種普遍存在于生物體細(xì)胞質(zhì)中能敏感反映神經(jīng)元損傷的神經(jīng)系統(tǒng)特異糖酵解酶。

NSE最早是作為小細(xì)胞肺癌的腫瘤標(biāo)記物，但近年來越來越多的研究結(jié)果表明NSE可作為各類神經(jīng)元損傷的特異性標(biāo)志。在腦血管病，尤其在腦出血方面，越來越受到人們的重視。測(cè)定NSE在腦出血的診斷、判斷疾病嚴(yán)重程度、估計(jì)預(yù)后和指導(dǎo)治療等方面具有重要意義。

在腦損傷性疾病中，神經(jīng)細(xì)胞中的NSE透過血腦屏障釋放入腦脊液及血液中，引起血清及腦脊液中NSE水平升高，不同程度及不同性質(zhì)的腦損傷NSE釋放的量及速度亦不相同，且在廣泛的腦損傷和越來越嚴(yán)重的繼發(fā)性腦損傷患者中NSE持續(xù)升高，因此，其水平不僅能反映原發(fā)性腦損傷的程度，而且能反映繼發(fā)性腦損傷的進(jìn)展。檢測(cè)血清NSE水平可為顱腦損傷和腦出血等腦血管性疾病診斷及預(yù)后判斷提供一種新的手段。NSE作為神經(jīng)重癥監(jiān)護(hù)的長期預(yù)后生物標(biāo)志物和治療指標(biāo)具有極好的潛力。

但是目前關(guān)于NSE的檢測(cè)，傳統(tǒng)的產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞不易保存，時(shí)間過長會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞狀態(tài)變差，甚至難以復(fù)蘇，產(chǎn)生抗體量降低，并且抗體的序列未知，無法對(duì)抗體做更深入的研究

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種ENO2單克隆抗體1C5及其制備方法和應(yīng)用

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種ENO2單克隆抗體1C5，所述單克隆抗體1C5包括重鏈和輕鏈；

所述輕鏈的可變區(qū)的互補(bǔ)決定區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.3所示；

所述重鏈的可變區(qū)的互補(bǔ)決定區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID NO.4～SEQ ID NO.6所示。

優(yōu)選的，所述單克隆抗體1C5的輕鏈可變區(qū)的骨架區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID NO.7～10所示；

所述單克隆抗體1C5的重鏈的可變區(qū)的骨架區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID NO.11～14所示。

優(yōu)選的，所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示；

所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID NO.16所示。