[發明專利]一種基于微量樣本的高通量識別血液中痕量有機污染物的方法

在審

• 申請號: 202210011503.3
• 申請日: 2022-01-06
• 公開（公告）號: CN114354808A
• 公開（公告）日: 2022-04-15
• 發明（設計）人: 韋斯;李萊輝;于南洋;王學兵;于紅霞
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 江蘇瑞途律師事務所 32346
• 代理人: 陳彬

本發明公開了一種基于微量樣本的高通量識別血液中痕量有機污染物的方法，屬于生物化學和分析化學領域，上述方法包括(1)樣品前處理：提取污染物；(2)上機測定：通過UPLC?Q?Exactive液質聯用對前處理后的樣品進行全掃描分析檢測；(3)樣品峰提取；(4)污染物識別：根據提取的樣品峰，通過庫匹配污染物靶向識別，和/或無法靶向識別的污染物利用分子網絡工具進行識別。本發明的方法僅需要微量體積(30?100μL)的血液樣品，大幅減少了樣品的使用量，結合靶向識別和非靶向篩查技術確保了樣品中有機化合物的檢出，實現了低樣本量、高通量、高靈敏識別并鑒定體內有機污染物，為環境暴露與人體健康關系的研究提供科學依據。

技術領域

本發明屬于生物化學和分析化學領域，具體涉及一種基于微量樣本的高通量識別血液中痕量有機污染物的方法。

背景技術

隨著工業的發展，環境中的有機污染物，如有機農藥、藥物個人護理產品(PPCP)和內分泌干擾物(EDCs)等，越來越多，環境也日益復雜。當人體暴露于環境時，環境中的有機污染物可以通過皮膚接觸、吸入或飲食等多種途徑進入人體，從外暴露向內暴露轉化，進而在體內富集或代謝，誘發炎癥、慢性病(如糖尿病等)和癌癥等疾病，對人類的健康構成嚴重威脅。血液(包括血清、血漿和全血)是了解人體受污染情況的主要生物檢材，因此識別血液中的有機污染物極其重要。

識別血液中的有機污染物包括靶向和非靶向兩種分析方法，前者用于高濃度化學物質，后者則用于低濃度化學物質。Rappaport等人研究發現人體系統中存在的多種外部環境污染物的濃度比食品、藥品化合物或代謝物的濃度低數千倍，且通常低于實驗室條件下非靶向方法的檢測限(S.M.Rappaport,et al.“The Blood Exposome and Its Role inDiscovering Causes of Disease”Environ.Health Perspect.122(8),769-774(2014))，因此需要較大體積的生物樣本來進行提取分析，例如美國國家健康與營養調查研究(NHANES)有關的方法需要10mL樣品用于測定血清中的難降解有機物。安捷倫公司專門開發的人血漿中難降解有機污染物的GC-MS/MS分析方法，將樣本的體積控制在200μL。

但是采集血液時，靜脈采血屬于侵入式采集方式，采樣較困難的人群(如嬰兒、老人等)的樣品非常珍貴，因此通常無法采集足夠量的樣本用于分析。樣本量不足，則無法進行非靶向分析，無法覆蓋樣本中大量低濃度的有機污染物，識別通量較低。

因此，開發一種小樣本體積、高通量識別化合物的有機污染物篩查方法是非常重要的。

發明內容

1.要解決的問題

本發明針對識別血液中痕量有機污染物需要樣本體積較大的問題，提供了一種基于微量樣本的高通量識別血液中痕量有機污染物的方法，只需微量體積(30-100μL)的血液樣本可以實現高通量、高靈敏識別體內有機污染物，為環境暴露與人體健康關系的研究提供科學依據。

2.技術方案

為了解決上述問題，本發明所采用的技術方案如下：

本發明提供了一種基于微量樣本的高通量識別血液中痕量有機污染物的方法，該方法包括如下步驟：

(1)樣品前處理：在96孔板中加入30～100μL血液樣品，按照血樣：萃取劑的體積：質量比為1：(0.54±0.2)的比例加入萃取劑，并加入固定體積的乙腈，渦旋混勻后離心取上清液，氮吹濃縮后使用100μL的乙腈復溶。

優選地，上述萃取劑為硫酸鎂-氯化鈉混合物。