[發(fā)明專利]一種水痘-帶狀皰疹病毒的IgM和IgG雙檢免疫層析試紙及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210009662.X
• 申請日: 2022-01-06
• 公開（公告）號: CN114324864A
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張改平;王愛萍;牛艷;周景明;陳玉梅;劉紅亮;梁超
• 申請（專利權(quán)）人: 鄭州大學(xué)
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/577;G01N33/58;G01N33/68;C12N15/867;C07K14/04;C07K16/08
• 代理公司: 鄭州市華翔專利代理事務(wù)所(普通合伙) 41122
• 代理人: 張愛軍

本發(fā)明提供一種水痘?帶狀皰疹病毒的IgM和IgG雙檢免疫層析試紙及應(yīng)用。所述試紙包括支撐底板和固定在支撐底板上的吸附層，吸附層從測試端開始依次為樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊；硝酸纖維素膜上含有檢測線T1、檢測線T2及質(zhì)控線印跡；結(jié)合墊上標(biāo)記量子點標(biāo)記的gE蛋白偶聯(lián)物；檢測線T1標(biāo)記抗人IgG單克隆抗體；檢測線T2標(biāo)記抗人IgM單克隆抗體；質(zhì)控線標(biāo)記抗gE單克隆抗體。其中糖蛋白gE是利用慢病毒表達(dá)系統(tǒng)在CHO細(xì)胞中表達(dá)制得，VZV陽性血清可以特異性識別該gE糖蛋白。將純化的gE糖蛋白作為免疫原，通過免疫學(xué)方法免疫BALB/c小鼠制備gE單克隆抗體，能夠特異性的識別并結(jié)合gE蛋白。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種水痘-帶狀皰疹病毒的IgM和IgG雙檢免疫層析試紙及應(yīng)用，屬于生物檢測技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

水痘-帶狀皰疹病毒(varicella zoster virus，VZV)屬皰疹病毒科、α-皰疹病毒亞科，水痘病毒屬，感染局限于人類及部分高級靈長類動物，具有高度的種屬特異性。VZV病毒顆粒呈橢圓形顆粒，直徑150～200nm，是雙鏈DNA病毒，病毒核衣殼是由162個殼微粒組成的對稱20面體，病毒最外層有包膜。包膜上有至少8種糖蛋白，其中，糖蛋白gE在病毒包膜上含量最豐富，是病毒的主要抗原，也是制備病毒亞單位疫苗和檢測試劑的主要候選抗原。

VZV能引起水痘和帶狀皰疹兩種疾病。兒童時期感染VZV會引起水痘，水痘通常表現(xiàn)為輕癥自限性疾病；水痘痊愈后，病毒長期潛伏于脊髓后跟或腦神經(jīng)節(jié)的神經(jīng)元中，到了成人時期可再次激活引起帶狀皰疹(Herpes Zoster,HZ)，其并發(fā)癥包括皰疹后神經(jīng)痛、腦膜炎、皮膚細(xì)菌感染等。HZ的發(fā)病率隨著年齡逐漸增高，50歲以上人群的發(fā)病率高達(dá)80％。兒童期感染VZV，到成年后10％-20％的人可發(fā)生HZ。帶狀皰疹及皰疹后神經(jīng)痛的發(fā)生概率隨年齡增大而增大，這給老齡化社會造成了較大的社會負(fù)擔(dān)。目前，對于水痘和帶狀皰疹的治療尚無特效方法，接種疫苗是唯一有效且可靠的預(yù)防控制手段。

在水痘或帶狀皰疹患者中，血清中IgM和IgG特異性抗體都會出現(xiàn)。IgM出現(xiàn)在發(fā)疹1-4d后的血清中，檢出IgM抗體有助于建立早期診斷；IgG出現(xiàn)略晚，在發(fā)疹4-8周后達(dá)到高峰。此外，IgG的檢出可以對VZV易感人群進(jìn)行排查以及對疫苗免疫效果進(jìn)行評價。根據(jù)2021年9月16日國家藥監(jiān)局發(fā)布的《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》(國家市場監(jiān)督管理總局令第48號)，水痘-帶狀皰疹病毒IgG抗體檢測試劑屬于免于臨床試驗體外診斷試劑。目前，抗體檢測的常用方法主要有放免法、酶聯(lián)免疫吸附實驗，免疫熒光實驗等，但是這些檢測都需要昂貴的儀器，需要在實驗室進(jìn)行檢測，檢測手段復(fù)雜，檢測時間長。因此急需一種快速、準(zhǔn)確、靈敏、特異、低成本且對人員操作經(jīng)驗要求低的水痘-帶狀皰疹病毒抗體檢測方法，提高診斷效率。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)的不足和市場的需求，本發(fā)明的目的是提供一種水痘-帶狀皰疹病毒的IgM和IgG雙檢免疫層析試紙及應(yīng)用。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

一種水痘-帶狀皰疹病毒的IgM和IgG雙檢免疫層析試紙，所述試紙包括支撐底板和固定在支撐底板上的吸附層，吸附層從測試端開始依次為樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊；硝酸纖維素膜上含有檢測線T1、檢測線T2及質(zhì)控線印跡；所述結(jié)合墊上標(biāo)記的是量子點標(biāo)記的gE蛋白偶聯(lián)物；檢測線T1標(biāo)記的是抗人IgG單克隆抗體；檢測線T2標(biāo)記的是抗人IgM單克隆抗體；質(zhì)控線標(biāo)記的為抗gE單克隆抗體。

所述量子點標(biāo)記的gE蛋白偶聯(lián)物中的gE蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

所述gE蛋白的表達(dá)載體為真核重組慢病毒表達(dá)載體pLVX-gE-IRES-ZsGreen1。

所述真核重組慢病毒表達(dá)載體pLVX-gE-IRES-ZsGreen1的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。

所述gE蛋白的制備方法包括以下步驟：