[發(fā)明專利]一種水痘-帶狀皰疹病毒的IgM和IgG雙檢免疫層析試紙及應用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202210009662.X | 申請日： | 2022-01-06 |
| 公開（公告）號： | CN114324864A | 公開（公告）日： | 2022-04-12 |
| 發(fā)明（設計）人： | 張改平;王愛萍;牛艷;周景明;陳玉梅;劉紅亮;梁超 | 申請（專利權(quán)）人： | 鄭州大學 |
| 主分類號： | G01N33/569 | 分類號： | G01N33/569;G01N33/558;G01N33/577;G01N33/58;G01N33/68;C12N15/867;C07K14/04;C07K16/08 |
| 代理公司： | 鄭州市華翔專利代理事務所(普通合伙) 41122 | 代理人： | 張愛軍 |
| 地址： | 450002 河南*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 水痘 帶狀 皰疹病毒 igm igg 免疫 層析 試紙 應用 | ||
1.一種水痘-帶狀皰疹病毒的IgM和IgG雙檢免疫層析試紙，其特征在于，所述試紙包括支撐底板和固定在支撐底板上的吸附層，吸附層從測試端開始依次為樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊；硝酸纖維素膜上含有檢測線T1、檢測線T2及質(zhì)控線印跡；所述結(jié)合墊上標記的是量子點標記的gE蛋白偶聯(lián)物；檢測線T1標記的是抗人IgG單克隆抗體；檢測線T2標記的是抗人IgM單克隆抗體；質(zhì)控線標記的為抗gE單克隆抗體。
2.如權(quán)利要求1所述的水痘-帶狀皰疹病毒的IgM和IgG雙檢免疫層析試紙，其特征在于，所述量子點標記的gE蛋白偶聯(lián)物中的gE蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
3.如權(quán)利要求2所述的水痘-帶狀皰疹病毒的IgM和IgG雙檢免疫層析試紙，其特征在于，所述gE蛋白的表達載體為真核重組慢病毒表達載體pLVX-gE-IRES-ZsGreen1。
4.如權(quán)利要求3所述的水痘-帶狀皰疹病毒的IgM和IgG雙檢免疫層析試紙，其特征在于，所述真核重組慢病毒表達載體pLVX-gE-IRES-ZsGreen1的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
5.如權(quán)利要求2所述的水痘-帶狀皰疹病毒的IgM和IgG雙檢免疫層析試紙，其特征在于，所述gE蛋白的制備方法包括以下步驟：
(1)將gE蛋白信號肽以及gE蛋白胞外區(qū)序列優(yōu)化成CHO偏愛密碼子，合成優(yōu)化后的gE基因序列；所述優(yōu)化后的gE基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；
(2)構(gòu)建真核重組慢病毒表達載體pLVX-gE-IRES-ZsGreen1，簡稱pLVX-gE，pLVX-gE的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
(3)將pLVX-gE與慢病毒包裝質(zhì)粒PSPAX2及包膜質(zhì)粒PMD2.G共轉(zhuǎn)染293T細胞，收集慢病毒懸液后轉(zhuǎn)導CHO細胞，篩選CHO-gE陽性細胞；
(4)將CHO-gE陽性細胞擴大培養(yǎng)，加入SMS CHO-SUPI培養(yǎng)基添加液，誘導表達水痘-帶狀皰疹病毒的gE蛋白；
(5)收集gE蛋白的培養(yǎng)上清，對gE蛋白進行純化。
6.如權(quán)利要求1所述的水痘-帶狀皰疹病毒的IgM和IgG雙檢免疫層析試紙，其特征在于，所述的抗gE單克隆抗體是利用權(quán)利要求5的gE蛋白作為抗原制備的。
7.如權(quán)利要求1所述的IgM和IgG雙檢免疫層析試紙在水痘-帶狀皰疹病毒的IgM和IgG抗體檢測中的應用。
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