[發(fā)明專利]一種SNRPN父源缺失的檢測引物組、試劑盒及非診斷目的的檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210002485.2
• 申請日: 2022-01-05
• 公開（公告）號: CN114015771A
• 公開（公告）日: 2022-02-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 于超計;吳文立;王倩玉;肖江山;魏星
• 申請（專利權(quán)）人: 北京華諾奧美基因醫(yī)學(xué)檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6804;C12N15/11
• 代理公司: 成都頂峰專利事務(wù)所(普通合伙) 51224
• 代理人: 錢學(xué)宇

本發(fā)明屬于生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種SNRPN父源缺失的檢測引物組、試劑盒及非診斷目的的檢測方法。本方案通過設(shè)計了SNRPN位點檢測的引物組，及該引物組制成的試劑盒，能夠快速、準(zhǔn)確且靈敏地檢測出小胖威利綜合征中SNRPN父源缺失（或功能缺陷），填補(bǔ)臨床檢測空白，從常染色體基因突變層面輔助找出造成小胖威利綜合征的原因；實驗結(jié)果重復(fù)性好，精密度高。最快能在90分鐘內(nèi)完成檢測，節(jié)約檢測時間，加快檢測效率。檢測儀器僅依賴普通PCR儀，臨床推廣性高。當(dāng)父源性小胖威利綜合征中SNRPN缺失（或功能缺陷）時，患兒即表現(xiàn)出小胖威利的表型，針對此突變的檢測對于優(yōu)生優(yōu)育有著重大意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種SNRPN父源缺失的檢測引物組、試劑盒及非診斷目的的檢測方法。

背景技術(shù)

小胖威利綜合征，正式醫(yī)學(xué)名為普拉德-威利綜合征（英文Prader-WilliSyndrome，簡稱PWS），因來自父親的第15號染色體長臂（位置15q11-q13）基因突變導(dǎo)致的先天性終身性疾病，非孟德爾遺傳的表觀遺傳性罕見疾病，是多系統(tǒng)化異常的復(fù)雜綜合征。

小胖威利以肌張力低、生長發(fā)育遲緩、智能障礙、多食、肥胖及性腺功能減退為主要臨床特征。因下視丘功能障礙，患者無飽腹感，長期的強(qiáng)烈饑餓感導(dǎo)致過度攝食造成威脅生命的肥胖。目前尚無辦法根治，終身需在監(jiān)管下生活。發(fā)病無種族和性別差異，國內(nèi)發(fā)病率不明，預(yù)計中國5-10萬患者，每年新增1500-4500例（按照國外發(fā)病率1/12000至1/15000估算）。

目前有關(guān)研究顯示小胖威利綜合征中存在SNRPN、NDN、MAGEL2、MKRN3和Cl5orf 2印記基因，它們僅存在于父源15號染色體的等位基因上。SNRPN位于印跡中心區(qū)域，可編碼5種snoRNAs，被認(rèn)為與小胖威利表型有密切關(guān)系，也是最可靠的診斷位點，可檢出絕大多數(shù)小胖威利，并可用于產(chǎn)前診斷。正常人母源性小胖威利綜合征中SNRPN的CpG島高度甲基化，而父源SNRPN的CpG島未甲基化，因此母源性基因失活，而父源性SNRPN基因有表達(dá)（遺傳印記）。當(dāng)父源性小胖威利綜合征中SNRPN父源缺失（或功能缺陷）時，患兒即表現(xiàn)出小胖威利的表型。

小胖威利的致病原因及遺傳機(jī)制非常特殊且復(fù)雜，絕大多數(shù)病例為新的突變，即父母親皆正常，僅有極少數(shù)為遺傳。大部分可歸因于在卵子(精子)或胚胎形成階段產(chǎn)生的基因錯誤，也就是在15號染色體長臂上有10多個基因被遺漏或抑制。

小胖威利的病因肇因于第15號染色體印跡基因區(qū)的基因缺陷，且此基因缺陷來自父親，或同時擁有兩條來自母親的帶有此缺陷的第15號染色體，若此基因缺陷來自母親，則會造成Angelman syndrome(天使人綜合征)。

目前小胖威利綜合征的輔助診斷方法有：（1）高分辨率染色體分析（HRB）；（2）熒光原位雜交法（FISH）；（3）甲基化-特異性聚合酶鏈反應(yīng)（MS-PCR）；（4）甲基化特異性多重連接依賴性探針擴(kuò)增法（MS-MLPA）；（5）染色體微陣列分析（CMA）又稱“分子核型分析”。此外，還可使用全外顯子測序(父源缺失、突變)、微衛(wèi)星標(biāo)記、全基因組SNP微陣列芯片、Southern印跡雜交、DNA甲基化(MSP)、Affymetrix CytoScan芯片。《Parent-of-Origin Testing for15q11-q13 Gains by Quantitative DNA Methylation Analysis》公開的技術(shù)也是需要依賴熒光定量PCR儀器。這些檢測方法要么依賴于特定的檢測設(shè)備，如熒光定量PCR儀器、熒光顯微鏡、一代測序儀等；要么，具有操作復(fù)雜、技術(shù)要求高。