[發明專利]鑒定冠狀病毒的交叉反應性抗體的方法

在審

• 申請號: 202180052410.9
• 申請日: 2021-07-09
• 公開（公告）號: CN116547535A
• 公開（公告）日: 2023-08-04
• 發明（設計）人: 賈普·古德斯米特;瑪麗特·約翰娜·范·吉爾斯;羅吉爾·威廉·桑德斯
• 申請（專利權）人: 萊頓實驗室有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

1.一種用于鑒定冠狀病毒的交叉反應性抗體的方法，其特征在于：所述方法包括步驟：

(a)提供來自一或多位人類受試者的血漿樣本，優選地至少45歲或以上，所述樣本在一時間點(X)獨立地被收集，

(b)鑒定具有血漿樣本的受試者，所述血漿樣本具有結合至少兩種，優選地至少四種人類冠狀病毒(HCoV)的免疫球蛋白，其中所述HCoV是選自HCoV-NL63、HCoV-OC43、HCoV-229E及HCoV-HKU1；

(c)提供來自所述經鑒定的受試者的PBMC樣本，其中所述PBMC樣本在時間點(X)或更晚被收集，且所述PBMC樣本包括選自記憶B細胞、漿細胞及漿母細胞的B細胞；

(d)篩選由(c)的B細胞所編碼的抗體或其抗原結合片段，以結合來自至少兩種，優選地至少四種不同的冠狀病毒的S(刺突)蛋白的S2胞外域的至少一部分；

(e)選擇抗體或其抗原結合片段，其結合至少一常見人類冠狀病毒的S蛋白的S2胞外域的至少一部分，所述常見人類冠狀病毒是選自HCoV-NL63、HCoV-OC43、HCoV-229E及HCoV-HKU1，以及結合至少一高致病性人類冠狀病毒的S蛋白的S2胞外域的至少一部分，所述高致病性人類冠狀病毒是選自SARS-CoV-1、MERS-CoV及SARS-CoV-2；優選地，其中所述經選擇的抗體或其抗原結合片段亦結合一動物冠狀病毒的S蛋白的S2胞外域的至少一部分；

(f)從(e)中選擇抗體或其抗原結合片段，其抑制至少一常見人類冠狀病毒的病毒融合、感染及/或復制，所述常見人類冠狀病毒是選自HCoV-NL63、HCoV-OC43、HCoV-229E及HCoV-HKU1，以及其抑制至少一高致病性人類冠狀病毒的病毒融合、感染及/或復制，所述高致病性人類冠狀病毒是選自SARS-CoV-1、MERS-CoV及SARS-CoV-2；

(g)確定來自(f)的經選擇的抗體或其抗原結合片段在選自SARS-CoV-1、MERS-CoV及SARS-CoV-2的HCoV感染的體內模型中預防或降低感染的能力；以及

(h)選擇在選自SARS-CoV-1、MERS-CoV及SARS-CoV-2的HCoV感染的體內模型中預防或降低感染的抗體或其抗原結合片段。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法進一步包括步驟：提供來自多個受試者的額外的血漿樣本，其中所述樣本在一時間點(Y)被收集，其中時間點(Y)比時間點(X)早或晚至少3個月。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：選擇來自一受試者的血漿樣本，相較于在較早或較晚的時間點所收集的受試者的血漿樣本，其具有增加的免疫球蛋白，所述免疫球蛋白結合至少兩種HCoV。

4.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其特征在于：所述血漿樣本具有獨立地結合至少兩種HCoV的IgG、IgM及/或IgA免疫球蛋白。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述免疫球蛋白結合HCoV刺突蛋白的S2結構域。

6.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其特征在于：步驟(d)包括篩選抗體或其抗原結合片段，以結合來自至少兩種、優選地至少四種不同的冠狀病毒的S蛋白的融合肽、HR1七肽重復序列或HR2七肽重復序列的至少一部分。

7.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其特征在于：步驟(e)包括選擇抗體或其抗原結合片段，其結合HCoV-NL63、HCoV-OC43、HCoV-229E及HCoV-HKU1的S蛋白的S2結構域的至少一部分。

8.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其特征在于：步驟(e)包括選擇抗體或其抗原結合片段，其結合SARS-CoV-1、MERS-CoV及SARS-CoV-2的S蛋白的S2結構域的至少一部分。