[發明專利]一種能夠催化萊鮑迪苷A生成多種甜菊糖苷衍生物的糖基轉移酶CaUGT

在審

• 申請號: 202111680606.0
• 申請日: 2021-12-30
• 公開（公告）號: CN115558651A
• 公開（公告）日: 2023-01-03
• 發明（設計）人: 宋浩;汪振洋;馬媛媛;魏曉珍;洪解放
• 申請（專利權）人: 中化健康產業發展有限公司;天津大學
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12N15/75;C12N15/81;C12N1/21;C12N1/19;C12P19/56;C12P19/18;C12R1/19;C12R1/125;C12R1/84;C12R1/865
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 琪琛

1.一種催化萊鮑迪苷A生成多種甜菊糖苷衍生物的辣椒糖基轉移酶CaUGT，其特征在于，所述辣椒來源糖基轉移酶CaUGT核酸序列為：

a)SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；

b)或與a)的核苷酸序列不同，能夠編碼SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的核苷酸序列。

2.一種重組載體，其特征在于，是將權利要求1所述辣椒來源糖基轉移酶CaUGT基因克隆到包括pPICZα-A/B/C、pPIC9K、pPIC9、pPinkα-HC、pYES2、YCplac33、YEplac195、pHT01、pHT08、pHT43、pET系列載體、pMAL、pCOLD系列載體和pBAD系列載體中的任意一種，構建得到重組載體。

3.一種重組菌，其特征在于，將權利要求2所述的重組載體轉化到宿主細胞中，得到的重組菌；所述宿主細胞包括埃希氏菌屬、巴斯德畢赤酵母菌、釀酒酵母、枯草芽孢桿菌中的任意一種。

4.根據權利要求3所述的重組菌，其特征在于，所述埃希氏菌屬包括E.coliBL21(DE3)、BL21star(DE3)、Tuner(DE3)、T7Express和BL21-A1中的任意一種。

5.糖基轉移酶CaUGT在催化萊鮑迪苷A生成多種甜菊糖苷衍生物的應用，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將能夠表達辣椒糖基轉移酶CaUGT的重組菌接種在含有誘導劑的培養基中培養；

(2)收集步驟(1)中獲得的重組蛋白純化后，獲得純化酶CaUGT；

(3)將步驟(2)獲得的純化酶加入到含有萊鮑迪苷A、UDPG、金屬陽離子及緩沖液的反應體系中，進行糖基化反應催化生成多種甜菊糖苷衍生物。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述步驟(1)重組菌的誘導表達方式是為：將重組菌接種到LB培養基中培養至OD600＝0.5-0.9時，加入0.1-1.2M異丙基-β-D-硫代半乳糖苷誘導表達。

7.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述的重組菌誘導表達溫度在18-30℃，誘導表達時間5-17h；將誘導后菌液離心，收集菌體，破胞后離心得到重組酶。

8.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述的多種甜菊糖苷產物包括萊鮑迪苷D萊鮑迪苷I和萊鮑迪苷M2中的任意一種。

9.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述步驟(3)糖基化反應的溫度為18℃-60℃，糖基化反應時間為6～96h，糖基化反應體系的pH為5.0-10.5。