[發(fā)明專利]新型冠狀病毒抗原和總抗體聯(lián)合檢測試劑盒及檢測方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202111676795.4 | 申請日： | 2021-12-31 |
| 公開（公告）號： | CN114295829B | 公開（公告）日： | 2022-11-04 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 尚紅;韓曉旭;馮永輝;蘭玉勇 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院;沈陽醫(yī)陸生物科技有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/569 | 分類號： | G01N33/569;G01N33/577;G01N33/68;G01N33/543;G01N21/76 |
| 代理公司： | 遼寧銘合專利代理事務(wù)所(普通合伙) 21262 | 代理人： | 孫兵 |
| 地址： | 110001 遼寧*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 新型 冠狀病毒 抗原 抗體 聯(lián)合 檢測 試劑盒 方法 | ||
1.一種新型冠狀病毒抗原和總抗體聯(lián)合檢測試劑盒，其特征在于，由R1磁珠、R2吖啶、R3吖啶和R4樣本處理液組成，使得在一個試劑盒中分別測定新冠病毒抗原及抗體兩個靶標；
所述R1磁珠由抗新冠病毒N蛋白鼠源性單克隆抗體及新冠病毒刺突蛋白S1亞基重組蛋白包被的順磁微粒以及磁珠稀釋液組成；
所述R2吖啶為吖啶標記的新冠病毒RBD蛋白；
所述R3吖啶為吖啶標記的抗新冠病毒N蛋白鼠源性單克隆抗體；
所述R4樣本處理液的組成成分為80mM Trizma base、50mM Trizma hydrochloride、15mM尿素、10mM EDTA、0.15％Tween-20和0.15％ProCl in-300，所述R4樣本處理液的pH為4.5；
其中，所述抗新冠病毒N蛋白鼠源性單克隆抗體的氨基酸序列和核苷酸序列分別如SEQID NO:1和SEQ ID NO:2所示；
所述新冠病毒刺突蛋白S1亞基重組蛋白的氨基酸序列和核苷酸序列分別如SEQ IDNO:3和SEQ ID NO:4所示；
所述新冠病毒RBD蛋白的氨基酸序列和核苷酸序列分別如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示，
所述聯(lián)合檢測試劑盒的靶標組合選自以下：抗新冠病毒N蛋白鼠源性單克隆抗體表位74-105aa與抗新冠病毒N蛋白鼠源性單克隆抗體表位Gly44-Glu174，S1蛋白表位Val 16-Arg685和RBD蛋白表位319-541aa；
所述抗新冠病毒N蛋白鼠源性單克隆抗體表位74-105aa的氨基酸序列和核苷酸序列分別如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示；
所述抗新冠病毒N蛋白鼠源性單克隆抗體表位Gly44-Glu174的氨基酸序列和核苷酸序列分別如SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10所示；
所述S1蛋白表位Val 16-Arg685的氨基酸序列和核苷酸序列分別如SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示；
所述RBD蛋白表位319-541aa的氨基酸序列和核苷酸序列分別如SEQ ID NO:13和SEQID NO:14所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型冠狀病毒抗原和總抗體聯(lián)合檢測試劑盒，其特征在于，所述抗新冠病毒N蛋白鼠源性單克隆抗體來源于小鼠腹水提取或雜交瘤細胞體外培養(yǎng)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型冠狀病毒抗原和總抗體聯(lián)合檢測試劑盒，其特征在于，抗新冠病毒N蛋白鼠源性單克隆抗體及新冠病毒刺突蛋白S1亞基重組蛋白包被的順磁微粒和磁珠濃度均為0.2mg/mL，所述吖啶的濃度為5ug/mL-25ug/mL，磁珠稀釋液的組成成分為50mM MES、0.15％BSA、0.15％Tween-20和0.5％ProClin-300，pH為7.0，吖啶稀釋液的組成成分為30mM PBS、0.15％BSA、0.1％G-Anti-H IgG、0.15％Tween-20和0.5％ProCl in-300，pH為7.0。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型冠狀病毒抗原和總抗體聯(lián)合檢測試劑盒，其特征在于，所述樣本為受檢者的血清、血漿、鼻咽拭子或胸水。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型冠狀病毒抗原和總抗體聯(lián)合檢測試劑盒，其特征在于，使用所述試劑盒的所述檢測方法為直接化學(xué)發(fā)光一步法，在一個試劑盒中分別測定新冠病毒抗原及抗體兩個靶標，并分別報告所述抗原及所述抗體兩個檢測結(jié)果。
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