[發(fā)明專利]基于CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建Bcl6基因超級(jí)增強(qiáng)子敲除動(dòng)物模型的方法及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111674544.2
• 申請(qǐng)日: 2021-12-31
• 公開（公告）號(hào): CN114958907A
• 公開（公告）日: 2022-08-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郝冰濤;廖世秀;秦利濤;陳妍紅;白潔;任嚴(yán)新;時(shí)偉麗;趙慧茹;楊文柯
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南省人民醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N15/85
• 分類號(hào): C12N15/85;C12N15/89;C12N15/113;C12N15/55;C12N15/12;A01K67/027
• 代理公司: 北京科家知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11427
• 代理人: 宮建華

1.基于CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建Bcl6基因超級(jí)增強(qiáng)子(Bcl6-SE)敲除動(dòng)物模型的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)靶向小鼠Bcl6-SE序列的gRNA設(shè)計(jì)：

根據(jù)Bcl6-SE序列設(shè)計(jì)一對(duì)相應(yīng)的gRNA，所述gRNA的序列如SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2所示；

2)gRNA制備并顯微注射獲得F0小鼠：

將步驟1)中的一對(duì)gRNA進(jìn)行純化，并與cas9質(zhì)粒共同注射小鼠胚胎，獲得F0代小鼠；

3)鑒定Bcl6-SE基因型，篩選出陽性F0代小鼠；

4)陽性F0代小鼠與野生型小鼠雜交得到F1代小鼠，F(xiàn)1代雜合小鼠自交獲得純合后代，從而構(gòu)建得到Bcl6-SE敲除的動(dòng)物模型。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述構(gòu)建Bcl6-SE敲除動(dòng)物模型的方法，其特征在于，所述步驟3)用于Bcl6-SE基因型鑒定的引物包括公用上游引物和兩條下游引物，所述上游引物序列如SEQID NO.3所示，所述下游引物序列如SEQ ID NO.4和EQ ID NO.5所示。

3.一種Bcl6-SE敲除的動(dòng)物模型，其特征在于，由權(quán)利要求1或2所述方法構(gòu)建得到。

4.權(quán)利要求3所述的動(dòng)物模型可以T細(xì)胞發(fā)育過程中研究超級(jí)增強(qiáng)子對(duì)Bcl6Bcl6基因調(diào)控的機(jī)制。