[發(fā)明專利]一種rhG-CSF的發(fā)酵培養(yǎng)基及其發(fā)酵方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202111671633.1 | 申請日： | 2021-12-31 |
| 公開（公告）號： | CN114350588A | 公開（公告）日： | 2022-04-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 張貴民;冀成法;馬魯南;劉忠 | 申請（專利權(quán)）人： | 山東新時代藥業(yè)有限公司 |
| 主分類號： | C12N1/38 | 分類號： | C12N1/38;C12N1/20;C12P21/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 273400 *** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 rhg csf 發(fā)酵 培養(yǎng)基 及其 方法 | ||
1.一種生產(chǎn)rhG-CSF的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，其特征在于，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基中包含如下所示的組分：碳源、酵母提取物、胰蛋白胨、十二水合磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化銨、氯化鈉、硫酸亞鐵、硫酸鎂和消泡劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，其特征在于，所述碳源為山梨醇或甘露醇中的一種或組合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，其特征在于，所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基中包含如下所示的組分：
其中，碳源濃度為200-600g/L，碳源需要單獨配制。
4.一種用于生產(chǎn)rhG-CSF的發(fā)酵方法，其特征在于，具體技術(shù)方案如下：
I.將工程菌菌種在種子培養(yǎng)基中逐級放大，獲得種子液；
II.將種子液接種至權(quán)利要求1所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基中進行高密度培養(yǎng)，流加碳源，分批次流加補料培養(yǎng)基至培養(yǎng)結(jié)束。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的發(fā)酵方法，其特征在于，所述工程菌菌種為pET-G-CSF/BL21(DE3)PlysS。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的發(fā)酵方法，其特征在于，流加碳源是在步驟II開始培養(yǎng)2-4h后流加至發(fā)酵體系中，并控制2-4h流加完畢。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的發(fā)酵方法，其特征在于，所述分批次流加補料培養(yǎng)基為分兩次流加補料培養(yǎng)基，第一次流加補料培養(yǎng)基是指發(fā)酵體系溶氧和pH同步上升時流加補料培養(yǎng)基1；第二次流加補料培養(yǎng)基是指加入誘導(dǎo)劑后流加補料培養(yǎng)基2。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的發(fā)酵方法，其特征在于，所述補料培養(yǎng)基1包含如下所示的組分：山梨醇或甘露醇400-600g/L，酵母提取物35-55g/L，胰蛋白胨45-75g/L，硫酸鎂0.5-3g/L；補料培養(yǎng)基2包含如下所示的組分：山梨醇或甘露醇200-300g/L，乳糖200-300g/L，胰蛋白胨45-75g/L，硫酸鎂0.5-3g/L。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的發(fā)酵方法，其特征在于，第一次補料結(jié)束后，當(dāng)發(fā)酵液的OD600值增長至30-40時，加入誘導(dǎo)劑進行誘導(dǎo)培養(yǎng)，所述誘導(dǎo)劑為IPTG和乳糖中的一種或組合。
10.根據(jù)權(quán)利要求4所述的發(fā)酵方法，其特征在于，所述的高密度培養(yǎng)過程中控制發(fā)酵液溶氧量不低于30％，發(fā)酵溫度為32-37℃，pH為6.8±0.2。
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