[發明專利]用于檢測多巴胺D3靶點化合物生物學活性的細胞系和方法

在審

• 申請號: 202111652413.4
• 申請日: 2021-12-30
• 公開（公告）號: CN114369578A
• 公開（公告）日: 2022-04-19
• 發明（設計）人: 葉飄;錢蕓;吳鳴;葛玉強;張藝婷;胡志京;萬澤紅
• 申請（專利權）人: 上海樞境生物科技有限公司;江蘇恩華藥業股份有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/12;C12N15/53;C12Q1/02;G01N21/64;C12R1/91
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1.一種用于檢測多巴胺D3靶點化合物生物學活性的細胞系，其特征在于，包括(a)編碼多巴胺D3受體蛋白的多核苷酸；以及(b)編碼由CRE轉錄調控元件控制表達的熒光素酶的多核苷酸。

2.如權利要求1所述的細胞系，其特征在于，所述細胞系為哺乳動物細胞，優選為CHO細胞；更優選為CHO-K1細胞。

3.如權利要求2所述的細胞系，其特征在于，所述多巴胺D3受體蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述熒光素酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；

優選地，所述(a)中，編碼多巴胺D3受體蛋白的多核苷酸的序列為SEQ ID NO:1；和/或，所述(b)中，編碼由CRE轉錄調控元件控制表達的熒光素酶的多核苷酸的序列為SEQ ID NO:2。

4.如權利要求1～3中任一項所述的細胞系，其特征在于，所述細胞系的保藏編號為CCTCC NO:C2021240。

5.一種如權利要求1～4中任一項所述的細胞系在檢測選自針對多巴胺D3靶點的小分子化合物、單克隆抗體或其中和抗體、Fc融合蛋白之一或其組合中的應用。

6.一種如權利要求1～4中任一項所述的細胞系在檢測預防和/或治療哺乳動物與多巴胺D3受體相關的神經精神類疾病藥物中的應用。

7.一種多巴胺D3靶點化合物生物學活性的檢測方法，其特征在于，步驟包括：(1)制備不同濃度梯度的供試品，將其分別與權利要求1～4中任一項所述的細胞系接觸；(2)測定各細胞系表達的熒光素酶水平變化；(3)計算供試品的生物活性，其中所述供試品為多巴胺D3靶點候選藥物溶液。

8.如權利要求7所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟(1)中，在供試品與細胞系充分接觸后，進一步添加福司可林溶液處理細胞系。

9.如權利要求8所述的檢測方法，其特征在于，所述福司可林溶液的終濃度為0.2～0.6μM；

優選地，所述福司可林溶液的終濃度為0.3～0.5μM；更優選地，所述福司可林溶液的終濃度為0.4μM。

10.如權利要求7所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟(2)為用熒光素酶檢測試劑盒測定供試組各細胞系表達的熒光素酶水平變化，并與陽性對照組比較；其中所述陽性對照組與供試組的區別在于將供試品多巴胺D3靶點候選藥物溶液替換為多巴胺溶液；

優選地，還包括設置高對照和低對照，所述高對照設置為添加福司可林溶液，低對照設置為添加福司可林和多巴胺混合溶液；

更優選地，所述細胞系中的細胞數目為5000～20000個/孔，優選10000個/孔。

11.如權利要求10所述的檢測方法，其特征在于，所述步驟(2)中，所述供試品與所述細胞系接觸后，在37℃培養箱孵育15～30min后加入福司可林溶液，置于37℃細胞培養箱繼續孵育3～6h；和/或，所述檢測過程中的高對照設置為添加終濃度為0.2～0.6μM，優選0.3～0.5μM，更優選0.4μM福司可林溶液；和/或，所述檢測過程中的低對照設置為添加終濃度為0.2～0.6μM，優選0.3～0.5μM，更優選0.4μM福司可林溶液和≥10nM、優選10nM～10μM，更優選10nM～1μM的多巴胺溶液。