[發明專利]一種多孔磷酸鈣的蛋白質負載量的檢測方法

在審

• 申請號: 202111650231.3
• 申請日: 2021-12-30
• 公開（公告）號: CN114324210A
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 何亞清;曹雪華;吳文靜;魏東升;王萌;岳述榮
• 申請（專利權）人: 上海瑞邦生物材料有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 上海邦德專利代理事務所(普通合伙) 31312
• 代理人: 梁劍

本發明公開了一種多孔磷酸鈣的蛋白質負載量的檢測方法，包括：(1)將負載有蛋白質的多孔磷酸鈣溶解于鹽酸溶液中，獲得測試液；(2)向測試液中加入Bradford工作液進行反應，獲得反應液；(3)測量反應液的吸光度；(4)確定反應液的吸光度所對應的蛋白質濃度；(5)基于蛋白質濃度，確定多孔磷酸鈣的蛋白質負載量。該檢測方法能夠簡便又準確的檢測多孔磷酸鈣的蛋白質負載量。

技術領域

本發明涉及檢測方法領域，特別是涉及一種多孔磷酸鈣的蛋白質負載量的檢測方法。

背景技術

多孔磷酸鈣固化體是通過磷酸鈣粉末添加液相及致孔劑制備的具有多孔結構的磷酸鈣固化體。由于磷酸鈣具有優良的生物活性、生物相容性、生物可降解性、自固化能力以及易塑性，因此廣泛地應用于骨修復領域，特別在修復硬組織缺損、骨折治療以及骨病治療等骨科臨床中顯示出良好的效果。多孔磷酸鈣具有較多的孔隙，較大的比表面積，十分適合作為載體使用。

將蛋白質負載與多孔磷酸鈣后，由于緩釋作用，無法利用純化水浸泡將蛋白質短時間釋放，從而難以測定多孔磷酸鈣負載的蛋白質的含量。

發明內容

本發明的目的是提供一種多孔磷酸鈣的蛋白質負載量的檢測方法，能夠簡便又準確的檢測多孔磷酸鈣的蛋白質負載量。

為解決上述技術問題，本發明采用的一個技術方案是：提供.一種多孔磷酸鈣的蛋白質負載量的檢測方法，包括：(1)將負載有蛋白質的多孔磷酸鈣溶解于鹽酸溶液中，獲得測試液；(2)向測試液中加入Bradford工作液進行反應，獲得反應液；(3)測量反應液的吸光度；(4)確定反應液的吸光度所對應的蛋白質濃度；(5)基于蛋白質濃度，確定多孔磷酸鈣的蛋白質負載量。

其中，蛋白質為rhBMP-2蛋白質。

其中，步驟(1)中，鹽酸溶液的濃度為0.5mol/L-2mol/L。

其中，步驟(1)中，負載有蛋白質的多孔磷酸鈣與鹽酸溶液的使用量比為1g：10-40mL。

其中，步驟(3)中，吸光度為在500nm-600nm波長光處的吸光度。

其中，向測試液中加入Bradford工作液進行反應，包括：反應溫度為20-40℃，反應時間為5-10min。

其中，步驟(4)包括：獲得吸光度與蛋白質濃度對應的標準曲線；將反應液的吸光度帶入標準曲線，獲得反應液的吸光度對應的蛋白質濃度。

其中，獲得吸光度與蛋白質濃度對應的標準曲線包括：制備梯度濃度的蛋白質溶液，檢測不同濃度蛋白質溶液的吸光度，以蛋白質濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，制得反映蛋白質濃度與吸光度關系的標準曲線。

其中，制備梯度濃度的蛋白質溶液，包括：梯度濃度的蛋白質溶液中蛋白質為標準牛血清蛋白。

其中，步驟(5)包括，蛋白質濃度與測試液體積的乘積除以負載有蛋白質的多孔磷酸鈣的質量，即為多孔磷酸鈣的蛋白質負載量。

本發明具有以下有益效果，

利用鹽酸將負載有蛋白質的多孔磷酸鈣溶解，將蛋白質完全釋放。本申請通過控制鹽酸的濃度以及檢測時間等條件，減少常規Bradford法進行蛋白濃度測定時鹽酸的影響。本申請發現多孔磷酸鈣本身可中和鹽酸部分酸性，降低鹽酸的影響，從而能夠精確的檢測蛋白質的含量。

附圖說明

圖1是根據本申請一實施例的多孔磷酸鈣的蛋白質負載量的檢測方法的流程示意圖。

圖2是根據本申請實施例的不同比例下含rhBMP-2磷酸鈣的溶解情況圖。

具體實施方式

為使本申請的目的、技術方案及效果更加清楚、明確，以下參照附圖并舉實施例對本申請進一步詳細說明。