[發明專利]一種多功能復合探針的制備方法

在審

• 申請號: 202111645598.6
• 申請日: 2021-12-30
• 公開（公告）號: CN114280297A
• 公開（公告）日: 2022-04-05
• 發明（設計）人: 諸葛鑫
• 申請（專利權）人: 智享生物（蘇州）有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;C12Q1/70;G01N33/531;G01N33/543;G01N33/68;B22F9/24;B82Y40/00
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 王熙文

本發明公開了一種多功能復合探針的制備方法：將甲基三辛基氯化銨、甲基丙烯酸聚乙二醇酯溶于水中，加入2?乙烯基吡啶和二乙烯基苯，攪拌升溫，加入偶氮二異丁基脒鹽酸鹽溶液，攪拌反應制得乳膠粒子分散體，將其和氯金酸溶液攪拌混合處理，加入二甲胺基甲硼烷溶液攪拌還原，制得改性納米金顆粒；將氨基化的磁性材料、改性納米金顆粒分散在去離子水中，加入EDC和NHS的MES緩沖液，攪拌混合，加入DNA探針分散液，攪拌處理，加入PBS緩沖液，靜置處理，將混合液過濾，過濾得到的固體重新分散在PBS緩沖液中，制得多功能復合探針分散液。該方法制得的復合探針穩定性好，用于檢測乙肝病毒時，靈敏度高。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，具體涉及一種多功能復合探針的制備方法。

背景技術

乙型肝炎是乙肝病毒(HBV)所引起的一種傳播快、潛伏期長、危害廣的傳染病，我國慢性無癥狀HBV感染者或慢性無癥狀HBV攜帶者已超過1.2億，是HBV感染者中存在數量最大的群體。采用有效的指標和方法實現早期診斷和病情監測對于控制傳播、判斷預后和指導用藥都有重要意義。目前，臨床診斷乙肝的主要手段是利用抗原抗體反應和聚合物酶鏈反應，前者會存在一定的窗口期漏檢的情況，而后者在檢測的過程中又經常發生交叉污染而造成假陽性率高，上述問題限制了其應用。隨著納米材料的發展，為醫學檢測也提供了新的方向。因此，如何制備性能優異的納米材料并將其與蛋白質/核酸等生物分子進行結合，對于病毒檢測具有重要的意義。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是：針對現有技術存在的不足，提供一種多功能復合探針的制備方法，該方法制得的復合探針穩定性好，用于檢測乙肝病毒時，靈敏度高。

為解決上述技術問題，本發明的技術方案是：

一種基于多功能復合探針的病毒檢測方法，包括以下步驟：

(1)將甲基三辛基氯化銨、甲基丙烯酸聚乙二醇酯溶于去離子水中，然后加入2-乙烯基吡啶和二乙烯基苯，攪拌升溫，之后加入偶氮二異丁基脒鹽酸鹽溶液，繼續攪拌反應，反應結束后將反應液離心處理，離心得到的沉淀采用去離子水分散，制得乳膠粒子分散體；

(2)將乳膠粒子水分散體和加入氯金酸溶液攪拌混合處理，之后加入二甲胺基甲硼烷溶液攪拌還原，制得改性納米金顆粒；

(3)氮氣氣氛下，將二氯化鐵和三氯化鐵溶于去離子水中，然后升溫，并加入氫氧化鈉溶液進行第一次攪拌反應，反應結束后冷卻至室溫，將反應液過濾，制得四氧化三鐵納米顆粒，將其分散在無水乙醇中，加入APTES，進行第二次攪拌反應，反應結束后，真空干燥，制得氨基化的磁性材料；

(4)將上述氨基化的磁性材料、改性納米金顆粒分散在去離子水中，之后加入EDC和NHS的MES緩沖液，攪拌混合處理，然后加入DNA探針分散液，攪拌處理，之后加入PBS緩沖液，靜置處理，之后將混合液過濾，過濾得到的固體重新分散在PBS緩沖液中，制得多功能復合探針分散液。

作為上述技術方案的優選，步驟(1)中，所述偶氮二異丁基脒鹽酸鹽溶液的濃度為1.5wt％，所述甲基三辛基氯化銨、去離子水、甲基丙烯酸聚乙二醇酯、2-乙烯基吡啶、二乙烯基苯、偶氮二異丁基脒鹽酸鹽溶液的用量比為3g：300ml：(4-5)g：50g：(2-3)g：20ml。

作為上述技術方案的優選，步驟(1)中，所述攪拌升溫是將溶液加熱至60℃后攪拌1h；所述攪拌反應的溫度為60℃，攪拌反應的時間為24h。

作為上述技術方案的優選，步驟(2)中，所述乳膠粒子水分散體的濃度為3wt％，氯金酸溶液的濃度為40mmol/L，二甲胺基甲硼烷溶液的濃度為13mmol/L，乳膠粒子水分散體、氯金酸溶液、二甲胺基甲硼烷溶液的用量比為(1-2)g：5ml：(14-15)ml。

作為上述技術方案的優選，步驟(2)中，所述攪拌混合處理的時間為2-3h，攪拌還原處理的時間為2-3h。