[發明專利]一種多功能復合探針的制備方法

在審

• 申請號: 202111645598.6
• 申請日: 2021-12-30
• 公開（公告）號: CN114280297A
• 公開（公告）日: 2022-04-05
• 發明（設計）人: 諸葛鑫
• 申請（專利權）人: 智享生物（蘇州）有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;C12Q1/70;G01N33/531;G01N33/543;G01N33/68;B22F9/24;B82Y40/00
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 王熙文

1.一種多功能復合探針的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將甲基三辛基氯化銨、甲基丙烯酸聚乙二醇酯溶于去離子水中，然后加入2-乙烯基吡啶和二乙烯基苯，攪拌升溫，之后加入偶氮二異丁基脒鹽酸鹽溶液，繼續攪拌反應，反應結束后將反應液離心處理，離心得到的沉淀采用去離子水分散，制得乳膠粒子分散體；

(2)將乳膠粒子水分散體和氯金酸溶液攪拌混合處理，之后加入二甲胺基甲硼烷溶液攪拌還原，制得改性納米金顆粒；

(3)氮氣氣氛下，將二氯化鐵和三氯化鐵溶于去離子水中，然后升溫，并加入氫氧化鈉溶液進行第一次攪拌反應，反應結束后冷卻至室溫，將反應液過濾，制得四氧化三鐵納米顆粒，將其分散在無水乙醇中，加入APTES，進行第二次攪拌反應，反應結束后，真空干燥，制得氨基化的磁性材料；

(4)將上述氨基化的磁性材料、改性納米金顆粒分散在去離子水中，之后加入EDC和NHS的MES緩沖液，攪拌混合處理，然后加入DNA探針分散液，攪拌處理，之后加入PBS緩沖液，靜置處理，之后將混合液過濾，過濾得到的固體重新分散在PBS緩沖液中，制得多功能復合探針分散液。

2.根據權利要求1所述的一種多功能復合探針的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述偶氮二異丁基脒鹽酸鹽溶液的濃度為1.5wt％，所述甲基三辛基氯化銨、去離子水、甲基丙烯酸聚乙二醇酯、2-乙烯基吡啶、二乙烯基苯、偶氮二異丁基脒鹽酸鹽溶液的用量比為3g：300ml：(4-5)g：50g：(2-3)g：20ml。

3.根據權利要求1所述的一種多功能復合探針的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述攪拌升溫是將溶液加熱至60℃后攪拌1h；所述攪拌反應的溫度為60℃，攪拌反應的時間為24h。

4.根據權利要求1所述的一種多功能復合探針的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述乳膠粒子水分散體的濃度為3wt％，氯金酸溶液的濃度為40mmol/L，二甲胺基甲硼烷溶液的濃度為13mmol/L，乳膠粒子水分散體、氯金酸溶液、二甲胺基甲硼烷溶液的用量比為(1-2)g：5ml：(14-15)ml。

5.根據權利要求1所述的一種多功能復合探針的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述攪拌混合處理的時間為2-3h，攪拌還原處理的時間為2-3h。

6.根據權利要求1所述的一種多功能復合探針的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，氫氧化鈉溶液的濃度為1.2mmol/ml，所述二氯化鐵、三氯化鐵、氫氧化鈉的摩爾比為(1.5-1.6)：3:13。

7.根據權利要求1所述的一種多功能復合探針的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，所述第一次攪拌反應的溫度為80-85℃，反應時間為1-2h；所述第二次攪拌反應的溫度為室溫，所述第二次攪拌反應的時間為7-8h。

8.根據權利要求1所述的一種多功能復合探針的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，所述四氧化三鐵納米顆粒、APTES的用量比為(0.1-0.2)g：0.5ml。

9.根據權利要求1所述的一種多功能復合探針的制備方法，其特征在于，步驟(4)中，EDC和NHS的MES緩沖液中EDC的濃度為0.6-0.7mmol/ml，NHS的濃度為1.4-1.5mmol/L；DNA探針分散液的質量濃度為1wt％；所述氨基化的磁性材料、改性納米金顆粒、EDC和NHS的MES緩沖液、DNA探針分散液的用量比為(0.2-0.3)g：0.015g：1ml：0.5ml。

10.根據權利要求1所述的一種多功能復合探針的制備方法，其特征在于，步驟(4)中，所述攪拌混合處理的的時間為30min，靜置處理的時間為48h。