[發(fā)明專利]一種新型冠狀病毒（2019-nCOV）IgG/IgM抗體檢測試劑盒及其制備方法

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• 申請日: 2021-12-29
• 公開（公告）號: CN114280296A
• 公開（公告）日: 2022-04-05
• 發(fā)明（設計）人: 劉巧娜;刁維均
• 申請（專利權(quán)）人: 中元匯吉生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種新型冠狀病毒(2019?nCOV)IgG/IgM抗體檢測試劑盒，所述試紙條包括：樣品墊、結(jié)合墊1、結(jié)合墊2、硝酸纖維素膜、吸水墊以及底襯；所述N蛋白?示蹤粒子復合物的標記過程包括：將N蛋白與酪蛋白鈉混勻后再加入膠體金溶液中；所述硝酸纖維素膜上設置有檢測線T2、檢測線T1以及質(zhì)控線C，所述檢測線T2上包被鼠抗人IgM單克隆抗體，所述檢測線T1上包被鼠抗人IgG單克隆抗體，所述質(zhì)控線上包被羊抗雞IgY抗體。本發(fā)明在膠體金與N蛋白標記過程中，通過將N蛋白與酪蛋白鈉提前混勻后再加入膠體金溶液中，解決了N蛋白與膠體金溶液標記容易出現(xiàn)聚沉死金現(xiàn)象的問題，同時顯著提升了試紙條的檢測性能。

技術(shù)領域

本發(fā)明涉及醫(yī)學檢驗領域，具體涉及一種新型冠狀病毒(2019-nCOV)IgG/IgM抗體檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術(shù)

膠體金免疫層析技術(shù)(Gold immunichromatogra-phy assay,GICA)是一種將膠體金標記技術(shù)、免疫檢測技術(shù)和層析和層析分析技術(shù)等多種方法有機結(jié)合在一起的固相標記免疫檢測技術(shù)。它的原理是：以條狀纖維層析材料為固相，通過毛細作用使樣品中的待測物與層析材料上針對待測物的受體(抗原或抗體)發(fā)生高特異性、高親和性的免疫反應，層析過程中免疫復合物被富集或截留在層析材料的一定區(qū)域(檢測帶)，運用可目測的標記物(膠體金)而得到直管的實驗現(xiàn)象(顯色)。而有力標記物則越過檢測帶，與結(jié)合標記物自動分離。這種分析技術(shù)具有操作簡單快速，可單份測定，無須特殊儀器等優(yōu)點，適合于各級醫(yī)療單位使用，亦可用于家庭成員的診斷、保健、體檢等方面。

膠體金可以和蛋白質(zhì)等各種生物大分子結(jié)合，膠體金顆粒帶有一層表面陰性電荷，與蛋白質(zhì)表面的陽性電荷通過靜電感應吸附，因此，環(huán)境pH和離子強度是影響吸附的主要因素，其他如膠體金顆粒的大小、蛋白質(zhì)分子量及蛋白質(zhì)濃度等也會影響蛋白質(zhì)吸附。雖然對于大部分蛋白質(zhì)來說，能夠較容易和膠體金結(jié)合吸附，但仍然存在部分蛋白質(zhì)在加入膠體金溶液后出現(xiàn)死金的現(xiàn)象(例如新冠病毒N蛋白)。通常這種情況，會先調(diào)整膠體金pH，如果不能改善，則對蛋白質(zhì)進行簡單處理，如稀釋、透析等。但對于一些蛋白質(zhì)，尤其價格昂貴的原料，蛋白質(zhì)的處理往往會帶來較大的損失，或者蛋白質(zhì)的量很少，不足以進行一次處理。這個時候需要一種有效的解決辦法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明通過在膠體金與標記蛋白的標記過程中加入適量酪蛋白酸鈉，可以有效解決因電荷作用造成的聚沉死金等異常現(xiàn)象，同時通過調(diào)節(jié)pH值保證了蛋白具有較高的標記效率，顯著提升了試紙條的檢測性能(包括穩(wěn)定性、靈敏度以及特異性)。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)手段：一種新型冠狀病毒(2019-nCOV)IgG/IgM抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括試紙條以及稀釋液，所述試紙條包括：樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊以及底襯，所述樣品墊、結(jié)合墊1、結(jié)合墊2、硝酸纖維素膜以及吸水墊依次搭接粘貼在所述底襯上；所述標記墊1上包被有RBD蛋白-示蹤粒子復合物，所述標記墊2上包被有N蛋白-示蹤粒子復合物；所述硝酸纖維素膜上設置有檢測線T2、檢測線T1以及質(zhì)控線C。

優(yōu)選地，所述示蹤粒子為膠體金。

優(yōu)選地，所述N蛋白-膠體金的標記過程包括：將N蛋白與酪蛋白鈉混勻后再加入膠體金溶液中，所述N蛋白與酪蛋白鈉的質(zhì)量比為1.25-5。

優(yōu)選地，所述膠體金溶液的pH為7.0-9.0，優(yōu)選為8.0。

優(yōu)選地，所述檢測線T2上包被鼠抗人IgM單克隆抗體，所述檢測線T1上包被鼠抗人IgG單克隆抗體，所述質(zhì)控線上包被羊抗雞IgY抗體。