[發明專利]一種新型冠狀病毒（2019-nCOV）IgG/IgM抗體檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 202111643684.3
• 申請日: 2021-12-29
• 公開（公告）號: CN114280296A
• 公開（公告）日: 2022-04-05
• 發明（設計）人: 劉巧娜;刁維均
• 申請（專利權）人: 中元匯吉生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種新型冠狀病毒(2019-nCOV)IgG/IgM抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括試紙條以及稀釋液，所述試紙條包括：樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊以及底襯，所述樣品墊、結合墊1、結合墊2、硝酸纖維素膜以及吸水墊依次搭接粘貼在所述底襯上；所述標記墊1上包被有RBD蛋白-示蹤粒子復合物，所述標記墊2上包被有N蛋白-示蹤粒子復合物；所述硝酸纖維素膜上設置有檢測線T2、檢測線T1以及質控線C。

2.根據權利要求1所述的一種新型冠狀病毒(2019-nCOV)IgG/IgM抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述示蹤粒子為膠體金。

3.根據權利要求2所述的一種新型冠狀病毒(2019-nCOV)IgG/IgM抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述N蛋白-膠體金的標記過程包括：將N蛋白與酪蛋白鈉混勻后再加入膠體金溶液中，所述N蛋白與酪蛋白鈉的質量比為1.25-5。

4.根據權利要求3所述的一種新型冠狀病毒(2019-nCOV)IgG/IgM抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述膠體金溶液的pH為7.0-9.0，優選為8.0。

5.根據權利要求4所述的一種新型冠狀病毒(2019-nCOV)IgG/IgM抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測線T2上包被鼠抗人IgM單克隆抗體，所述檢測線T1上包被鼠抗人IgG單克隆抗體，所述質控線上包被羊抗雞IgY抗體。

6.根據權利要求5所述的一種新型冠狀病毒(2019-nCOV)IgG/IgM抗體檢測試劑盒，其特征在于，所述稀釋液包括0.2-2.0g/L的緩沖液、0.2-10g/L鹽離子、1-2g/L的防腐劑；所述緩沖液選自十二水磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、MOPS、Tris緩沖液中的至少一種，優選為十二水磷酸氫二鈉以及磷酸二氫鉀的組合；所述鹽離子選自氯化鈉或氯化鉀中的至少一種，優選為氯化鈉以及氯化鉀的組合；所述防腐劑選自疊氮鈉或Proclin-300中的至少一種，優選為Proclin-300。

7.根據權利要求1-5任一項所述的一種新型冠狀病毒(2019-nCOV)IgG/IgM抗體檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)結合墊1的處理

將RBD蛋白加入膠體金溶液1中，標記10-30min后，加入2-10％封閉劑，攪拌10-30min后，10000rpm，離心20分鐘，棄上清，沉淀以膠體金標記復溶液恢復體積，得到RBD蛋白金標復合物，4℃保存；

將上述RBD蛋白金標復合物以OD20-OD50的濃度包被于結合墊1上，隨后冷凍干燥處理，即得結合墊1；

(2)結合墊2的處理

將N蛋白與酪蛋白鈉混勻后，加入膠體金溶液2中，標記10-30min后，加入2-10％封閉劑，攪拌10-30min后，10000rpm，離心20分鐘，棄上清，沉淀以膠體金標記復溶液恢復體積，得到N蛋白金標復合物，4℃保存；

將上述N蛋白金標復合物以OD10-OD40的濃度包被與結合墊2上，隨后冷凍干燥處理，即得結合墊2；

(3)硝酸纖維素膜的處理：

在硝酸纖維素膜上包被檢測線T2、檢測線T1以及質控線C后進行干燥處理：

a.檢測線T2的制備

將鼠抗人IgM單克隆抗體以1.0-3.0ul/cm噴涂于硝酸纖維素膜上靠近樣本墊端；

b.T1檢測線的制備：

將的鼠抗人IgG單克隆抗體以1.0-3.0ul/cm包被于T2檢測線側方，且遠離樣品墊端；；

d.C質控線的制備：

將的羊抗雞IgY抗體溶液以1.0-3.0ul/cm包被于T1檢測線側方，且遠離樣品墊端；

(4)組裝：

在底襯上依次粘貼樣品墊、硝酸纖維素膜以及吸水墊，切成3-5mm寬的試紙條。