[發明專利]一種利用高通量測序分析玉露香梨貯藏期間果實菌群落結構的方法在審
| 申請號： | 202111641027.5 | 申請日： | 2021-12-29 |
| 公開（公告）號： | CN114277176A | 公開（公告）日： | 2022-04-05 |
| 發明（設計）人： | 張曉宇;高振峰;王麗英;張立新;張新憲;侯亞茹 | 申請（專利權）人： | 山西農業大學食品科學與工程學院（山西省農業科學院農產品貯藏保鮮研究所） |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12Q1/6869;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京睿智保誠專利代理事務所(普通合伙) 11732 | 代理人： | 周新楣 |
| 地址： | 030031 *** | 國省代碼： | 山西;14 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 利用 通量 分析 玉露香梨 貯藏 期間 果實 群落 結構 方法 | ||
1.一種利用高通量測序分析玉露香梨貯藏期間果實菌群落結構的方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)將玉露香梨貯藏，每隔28～32d取樣一次，共取樣3～5次，得不同的玉露香梨樣本；
(2)分別提取上述不同玉露香梨樣本的微生物組總DNA，對所述微生物組總DNA進行PCR擴增，得PCR擴增產物；
(3)用上述所得的PCR擴增產物構建測序文庫；
(4)對上述測序文庫進行高通量測序，對測序數據進行OTU統計獲得玉露香梨貯藏期間果實的菌群落結構。
2.根據權利要求1所述一種利用高通量測序分析玉露香梨貯藏期間果實菌群落結構的方法，其特征在于，步驟(1)中所述貯藏的溫度為-2～2℃，所述貯藏的濕度為80～90％。
3.根據權利要求1或2所述一種利用高通量測序分析玉露香梨貯藏期間果實菌群落結構的方法，其特征在于，步驟(2)中所述PCR擴增的體系為DNA 3～5μL，正向引物1～3μL，反向引物1～3μL，Premix Tap 24～26μL和ddH2O 16～18μL，所述正向引物序列如SEQ IDNO.1所示，所述反向引物序列如SEQ ID NO.2所示。
4.根據權利要求3所述一種利用高通量測序分析玉露香梨貯藏期間果實菌群落結構的方法，其特征在于，步驟(2)中所述PCR擴增的條件為93～95℃預變性4～6min，93～95℃變性50～60s，45～55℃退火45～55s，70～75℃延伸50～60s，循環30～35次，70～75℃延伸8～12min。
5.根據權利要求1所述一種利用高通量測序分析玉露香梨貯藏期間果實菌群落結構的方法，其特征在于，步驟(4)所述高通量測序過程中，目的片段的長度為200～500bp。
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