[發明專利]電子煙中18種真菌毒素的檢測方法

在審

• 申請號: 202111640136.5
• 申請日: 2021-12-29
• 公開（公告）號: CN114324656A
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 張大偉;王亞紅;任瑩
• 申請（專利權）人: 羅瑪實驗室檢測服務（無錫）有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 無錫市匯誠永信專利代理事務所(普通合伙) 32260
• 代理人: 郭慧

本發明屬于煙油安全檢測技術領域，尤其涉及電子煙中18種真菌毒素的檢測方法。本發明提供的電子煙中18種真菌毒素的檢測方法，總體需要的檢測設備只有液相色譜質譜聯用儀。簡化了操作，一次性進行多種真菌毒素的篩查可以極大的降低檢測成本，同時可以提高效率。此外，采用同位素內標方法可以有效的校正基質效應，提高檢測結果的準確性和可靠性。本發明幫助國內電子煙企業進行了煙油的真菌毒素風險篩查，以獲取FDA準入的門檻。

技術領域

本發明屬于煙油安全檢測技術領域，尤其涉及電子煙中18種真菌毒素的檢測方法。

背景技術

電子煙又名虛擬香煙、電子香煙，它有著與香煙一樣的外觀，與香煙近似的味道，甚至比一般香煙的口味要多很多，也像香煙一樣能吸出煙、吸出味道跟感覺來。主要是用于戒煙和替代香煙。電子煙又是一種非燃燒的煙類替代型產品，他與普通香煙的某些特點相似，能夠提神、滿足吸煙者的快感和多年養成的使用習慣。為了能在最大程度上模擬傳統卷煙的香氣、香味和口感，目前電子煙煙油最常見的添加物為煙草提取物，通過提取獲得的煙草提取物與丙二醇、丙三醇和煙用香精等按一定配比混合而成。

根據美國FDA在2016年頒布的法規將電子煙產品納入煙草產品范圍，并接受FDA監管，未通過PMTA認證的產品不準在美國上市，美國FDA要求所有在美國市場銷售的電子煙產品需要進行成分清單提交申請，英文Premarket Tabacco Application，英文縮寫PMTA。其中有害及潛在有害物質報告中需要對其潛在有害物質進行評估，而其中由于煙葉存在發霉變質的可能，而其煙油的霉菌毒素檢測就成為非常關注的一環。

發明內容

針對上述現有技術的不足，本發明提供了電子煙中18種真菌毒素的檢測方法，目的是為了解決電子煙使用發霉煙葉導致其煙油中真菌毒素超標時，的技術問題。

本發明提供的電子煙中18種真菌毒素的檢測方法，具體技術方案如下：

電子煙中18種真菌毒素的檢測方法，包括如下步驟：

S1，將煙油樣品加入乙腈溶液中，放入超聲提取裝置進行超聲提取，取下層清夜，即獲得提取液；

S2，向步驟S1中的提取液中加入乙酸進行酸化處理，獲得混合樣品，所述混合樣品中加入凈化柱并進行渦旋處理，獲得含樣凈化柱；

S3，對步驟S2中的含樣凈化柱進行離心處理，獲得預處理液；

S4，向步驟S3中的預處理液中加入正離子內標和負離子內標，渦旋處理后進行離心處理，獲得樣品凈化液；

S5，步驟S4中的樣品凈化液上樣，采用HPLC-MS/MS對黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2、伏馬菌素B1、B2、B3、蛇形毒素、HT-2毒素、新茄病鐮刀菌烯醇(NEO)、T-2毒素、15-乙酰基嘔吐毒素、赭曲霉毒素A、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)、雪腐鐮刀菌烯醇(NIV)、3-乙酰基嘔吐毒素、瓜萎鐮刀菌素(FUX)、玉米赤霉烯酮進行定性定量分析。

在某些實施方式中，步驟S1中，所述乙腈溶液的濃度為50％，所述煙油樣品與所述乙腈溶液體積比為1:4；所述超聲提取的時間為30min。

在某些實施方式中，步驟S2中，所述提取液與所述乙酸的體積比為20:1，所述混合樣品中加入凈化柱中的體積為750μl。

在某些實施方式中，步驟S3中，離心時間為3min，離心轉速為10000rpm。

在某些實施方式中，步驟S4中，所述正離子內標為含0.5％乙酸的2mM乙酸銨溶液和乙腈按體積比9:1混合的混合液分別溶解黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2、伏馬菌素B1、B2、B3、蛇形毒素、HT-2毒素、新茄病鐮刀菌烯醇、T-2毒素、15-乙酰基嘔吐毒素、赭曲霉毒素A，所述負離子內標為含0.5％乙酸的2mM乙酸銨溶液和乙腈按體積比9:1混合的混合液分別溶解脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、雪腐鐮刀菌烯醇、3-乙酰基嘔吐毒素、瓜萎鐮刀菌素、玉米赤霉烯酮。