[發明專利]一種誘導鐵甲草莖段外植體不定芽再生的方法

有效

• 申請號: 202111635200.0
• 申請日: 2021-12-29
• 公開（公告）號: CN115191350B
• 公開（公告）日: 2023-02-28
• 發明（設計）人: 劉穎;周遠航;廖梓欣;劉虹潔;薛迎斌;陳建平;楊少瑕;趙敏;殷悅
• 申請（專利權）人: 廣東海洋大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州智斧知識產權代理事務所(普通合伙) 44649
• 代理人: 朱雙

本發明公開了一種誘導鐵甲草莖段外植體不定芽再生的方法。本發明開創性的發現銅離子、鎂離子、銀離子及硝普納對鐵甲草莖段外植體不定芽再生的促進效果，開發優化鐵甲草人工培育最佳培養基和培養條件，建立了一種快速有效的鐵甲草莖段外植體體外繁殖再生體系，簡化了組培方法，縮短了組培周期，提高了再生苗質量；為實現鐵甲草工廠化栽培提供了方法和依據，對于廣東地區對鐵甲草日益增長的市場需求具有一定的現實意義。

技術領域

本發明屬于植物細胞工程技術領域，具體涉及一種誘導鐵甲草莖段外植體不定芽再生的方法。

背景技術

鐵甲草(Cassia mimosoides Linn.)，別名山扁豆，為豆科(Leguminosae)決明屬植物，是一種多年生亞灌木狀披散草本植物。鐵甲草現分布于全球的熱帶和亞熱帶，我國的東南部、南部以及西南部是其廣泛分布的地區。鐵甲草本種常生長于荒地，耐旱耐瘠，可做綠肥，更是良好的覆蓋植物和改土植物。鐵甲草始載于在明朝《救荒本草》，可以全草入藥，有健脾利濕，清熱解毒，通便等功效，幼嫩莖葉可以代茶，根可治痢疾。因其特有的藥用價值，數百年來，民間廣為流傳。由于鐵甲草具有重要的藥用價值，目前市場上對其需求量與日俱增。然而，在自然環境下，鐵甲草存在種子萌發率低，種植步驟繁瑣，自然繁殖周期較長，母株優良品質難以保存等種種問題。

目前關于鐵甲草組培再生的研究報道還比較少，一般都是關注不同類型的激素或者不同濃度的激素對鐵甲草外植體組培再生效果的影響，并且已經報道的鐵甲草外植體不定芽再生培養的周期較長，一般至少需要80天，而且需要增殖培養和伸長培養等繁瑣的過程，嚴重制約了鐵甲草大規模擴繁的效率。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術中鐵甲草不定芽誘導和植株再生的過程中存在的誘導率低、質量較差和周期較長等問題，提供一種應用于高效誘導鐵甲草莖段外植體產生再生不定芽的方法。

本發明的為了提高誘導鐵甲草莖段外植體不定芽形成的質量和效率，開創性的采用不同濃度和不同類型的金屬離子來誘導莖段外植體產生不定芽，優化的條件可顯著提高愈傷組織誘導的效率和質量。再將所獲得再生芽條接種到添加了不同類型添加物的生根培養基上培養一段時間，就可以獲得完整的再生植株。

因此，本發明的目的是提供一種誘導鐵甲草莖段外植體不定芽再生的方法，包括以下步驟：

a.取鐵甲草種子，進行催芽處理和消毒處理，然后接種于MS固體培養基上進行種子無菌萌發培養；

b.取生長了15-25天的鐵甲草無菌植株，將根部和葉部都去除，保留莖；將莖切成小段，作為莖段外植體；

c.將莖段外植體軸向水平接種至不定芽誘導培養基，誘導培養不定芽；

d.將長度大于1cm的不定芽接種至生根培養基，誘導生根，獲得鐵甲草再生植株。

優選，所述的步驟a的催芽處理為：用80℃的水對種子進行恒溫浸泡處理10min。

優選，所述的步驟a的消毒處理為：用體積分數75％的乙醇水溶液消毒30-45s，然后用質量分數2.5％的NaClO水溶液消毒10-15min，期間不斷振蕩，滅菌水沖洗3-4次，每次1min。

優選，所述的MS固體培養基，含有：蔗糖30g/L和瓊脂8g/L，余量為MS培養基，pH5.8-6.0。

優選，所述的步驟b的將莖切成小段是將莖切成約0.5cm長小段。

優選，所述的不定芽誘導培養基，含有：TDZ 0.5mg/L、KT 2mg/L、硝普納1.2mg/L、AgCl 0.3mg/L、蔗糖30g/L和瓊脂8g/L，余量為MS培養基，pH 5.8-6.0。