[發(fā)明專利]一種誘導鐵甲草莖段外植體不定芽再生的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111635200.0
• 申請日: 2021-12-29
• 公開（公告）號: CN115191350B
• 公開（公告）日: 2023-02-28
• 發(fā)明（設計）人: 劉穎;周遠航;廖梓欣;劉虹潔;薛迎斌;陳建平;楊少瑕;趙敏;殷悅
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東海洋大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州智斧知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 44649
• 代理人: 朱雙

1.一種誘導鐵甲草莖段外植體不定芽再生的方法，其特征在于，包括以下步驟：

a.取鐵甲草種子，進行催芽處理和消毒處理，然后接種于MS固體培養(yǎng)基上進行種子無菌萌發(fā)培養(yǎng)；所述的MS固體培養(yǎng)基，由MS培養(yǎng)基、蔗糖30g/L和瓊脂8g/L組成，

pH 5.8-6.0；

b.取生長了15-25天的鐵甲草無菌植株，將根部和葉部都去除，保留莖；將莖切成小段，

作為莖段外植體；

c.將莖段外植體軸向水平接種至不定芽誘導培養(yǎng)基，誘導培養(yǎng)不定芽；所述的不定芽誘導培養(yǎng)基，為如下(1)-(3)中的任意一種：

(1)由MS培養(yǎng)基、TDZ 0.5mg/L、KT 2mg/L、硝普納1.2mg/L、CuCl₂ 0.3mg/L、蔗糖30g/L和瓊脂8g/L組成，pH 5.8-6.0；

(2)由MS培養(yǎng)基、TDZ 0.5mg/L、KT 2mg/L、硝普納1.2mg/L、MgSO₄·7H₂O 0.5mg/L、蔗糖30g/L和瓊脂8g/L組成，pH 5.8-6.0；

(3)由MS培養(yǎng)基、TDZ 0.5mg/L、KT 2mg/L、硝普納1.2mg/L、AgCl 0.3mg/L、蔗糖30g/L和瓊脂8g/L組成，pH 5.8-6.0；

d.將長度大于1cm的不定芽接種至生根培養(yǎng)基，誘導生根，獲得鐵甲草再生植株；所述的生根培養(yǎng)基，由MS培養(yǎng)基、IBA 0.1mg/L、DA-6 0.6mg/L、蔗糖30g/L和瓊脂8g/L組成，pH5.8-6.0。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟a的催芽處理為：用80℃的水對種子恒溫浸泡處理10min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟a的消毒處理為：用體積分數(shù)75％的乙醇水溶液消毒30-45s，然后用質(zhì)量分數(shù)2.5％的NaClO水溶液消毒10-15min，期間不斷振蕩，滅菌水沖洗3-4次，每次1min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟b的將莖切成小段是將莖切成0.5cm長小段。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的誘導鐵甲草莖段外植體不定芽再生的方法的培養(yǎng)條件為：光照強度2000lx，光照時間12小時/天，溫度25±1℃。