[發(fā)明專利]適配體功能化UCST型溫敏嵌段聚合物及其同步分離純化、固定化細(xì)胞色素C的應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111624169.0
• 申請(qǐng)日: 2021-12-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114349919A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-04-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉園園;李利利;蘭會(huì)玲;王蕾;韓娟;王赟;劉怡涵
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇大學(xué)
• 主分類號(hào): C08F293/00
• 分類號(hào): C08F293/00;C08F8/32;C07K14/80;C07K1/14;C07K17/08
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• 代理人: 暫無(wú)信息

1.適配體功能化UCST型溫敏嵌段聚合物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)RAFT鏈轉(zhuǎn)移劑CTA的制備

將3-巰基丙酸滴入氫氧化鉀水溶液中，在攪拌下逐滴滴加二硫化碳至溶液中，在室溫下反應(yīng)結(jié)束后，將溴化芐滴入反應(yīng)溶液中，然后將溶液加熱攪拌回流，反應(yīng)結(jié)束冷卻至室溫后，將混合物溶液倒入三氯甲烷中，滴加鹽酸酸化至有機(jī)相轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色，隨后，用過(guò)量的去離子水洗滌混合物，得到有機(jī)相，有機(jī)相經(jīng)無(wú)水硫酸鈉干燥后，減壓濃縮，加入適量的二氯甲烷后，置于冰箱，待產(chǎn)物結(jié)晶析出，用去離子水洗滌粗產(chǎn)物晶體，將所得的粗產(chǎn)物溶于三氯甲烷中，減壓濃縮、重結(jié)晶，重復(fù)上述操作數(shù)次，最后，將所得產(chǎn)物置于真空干燥箱中干燥過(guò)夜，得到黃色固體，即RAFT鏈轉(zhuǎn)移劑CTA；

(2)PEG大分子鏈轉(zhuǎn)移劑PEG₄₅-CTA的制備

A、將聚乙二醇單甲醚(PEG₄₅-OH)和步驟(1)制備的CTA溶于無(wú)水二氯甲烷中，得到溶液A，放置于冰水浴中；

B、將4-二甲氨基吡啶和N,N’-二環(huán)己基碳二亞胺溶于二氯甲烷中，得到溶液B；

C、將溶液B逐滴滴入溶液A中，在室溫下反應(yīng)結(jié)束后，過(guò)濾除去不溶鹽，將所得的濾液減壓濃縮，并用過(guò)量的冰乙醚沉淀，將獲得的沉淀物溶解在無(wú)水二氯甲烷中，減壓濃縮，用過(guò)量的冰乙醚沉淀，重復(fù)上述步驟數(shù)次，將所得沉淀置于真空干燥箱中室溫干燥過(guò)夜，得到淡黃色固體，即PEG大分子鏈轉(zhuǎn)移劑PEG₄₅-CTA；

(3)兩嵌段聚合物PEG₄₅-b-P(GMA₂₁-co-AAc₁₄₀)的制備

將步驟(2)制備的PEG₄₅-CAT，丙烯酸(AAc)，甲基丙烯酸縮水甘油酯(GMA)和引發(fā)劑偶氮二異丁腈(AIBN)溶于1,4-二氧六環(huán)中，轉(zhuǎn)移至帶有磁子的單口圓底燒瓶中，氮?dú)夤呐菀欢螘r(shí)間除去反應(yīng)溶液中的氧氣，在氮?dú)鈿夥障旅芊猓缓螅瑢A底燒瓶置于油浴鍋中攪拌反應(yīng)，待冰水浴淬滅反應(yīng)后，用1,4-二氧六環(huán)稀釋，并加入到過(guò)量的無(wú)水乙醚中沉淀，將所得的產(chǎn)物重新溶于1,4-二氧六環(huán)中，再用無(wú)水乙醚沉淀出產(chǎn)物，重復(fù)溶解-沉淀三次后，將所得產(chǎn)物置于真空干燥箱中干燥過(guò)夜，得到淡黃色固體,即兩嵌段聚合物PEG₄₅-b-P(GMA₂₁-co-AAc₁₄₀)；

(4)UCST型溫敏嵌段聚合物PEG₄₅-b-PAAm₁₇₆-b-P(GMA₂₁-co-AAc₁₄₀)的制備

將步驟(3)制備的PEG₄₅-b-P(GMA₂₁-co-AAc₁₄₀)、丙烯酰胺(AAm)和引發(fā)劑偶氮二異丁腈(AIBN)溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，轉(zhuǎn)移至帶有磁子的單口圓底燒瓶中，氮?dú)夤呐?0min后，在氮?dú)鈿夥障旅芊猓缓螅瑢A底燒瓶置于油浴鍋中攪拌反應(yīng)，冰水浴淬滅反應(yīng)后，用N,N-二甲基甲酰胺稀釋反應(yīng)，并加入到過(guò)量的無(wú)水乙醚中沉淀，將所得的產(chǎn)物重新溶于N,N-二甲基甲酰胺中，再用無(wú)水乙醚沉淀出產(chǎn)物，重復(fù)溶解-沉淀三次后，將所得產(chǎn)物置于真空干燥箱中干燥過(guò)夜，得到米白色固體，即為UCST型溫敏三嵌段聚合物PEG₄₅-b-PAAm₁₇₆-b-P(GMA₂₁-co-AAc₁₄₀)；

(5)適配體功能化UCST型溫敏嵌段聚合PEG₄₅-b-PAAm₁₇₆-b-P(GMA₂₁-co-AAc₁₄₀)-Apt的制備

A、在精密pH計(jì)監(jiān)測(cè)下，用檸檬酸溶液調(diào)節(jié)磷酸氫二鈉溶液的pH，得到pH為7.0的磷酸二氫鈉-檸檬酸緩沖溶液；

B、將步驟(4)制備的聚合物PEG₄₅-b-PAAm₁₇₆-b-P(GMA₂₁-co-AAc₁₄₀)溶于上述緩沖溶液中，得到PEG₄₅-b-PAAm₁₇₆-b-P(GMA₂₁-co-AAc₁₄₀)溶液；

C、將Cyt c的適配體(Apt)溶解于上述緩沖溶液中，與PEG₄₅-b-PAAm₁₇₆-b-P(GMA₂₁-co-AAc₁₄₀)溶液混合均勻后，放入恒溫振蕩箱中恒溫孵育，隨后，加入過(guò)量的甘氨酸繼續(xù)反應(yīng)，用于封閉未完全反應(yīng)的環(huán)氧基團(tuán)，待反應(yīng)結(jié)束，降低溫度的同時(shí)用HCl溶液降低溶液pH值，離心分離獲得PEG₄₅-b-PAAm₁₇₆-b-P(GMA₂₁-co-AAc₁₄₀)-Apt粗產(chǎn)物，并去除未參與反應(yīng)的適配體，將所得粗產(chǎn)物用上述緩沖溶液溶解，再降低溫度和pH值沉淀析出產(chǎn)物，重復(fù)溶解-沉淀三次后，離心分離獲得PEG₄₅-b-PAAm₁₇₆-b-P(GMA₂₁-co-AAc₁₄₀)-Apt產(chǎn)物。